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PROCESOS METABOLICOS



185 tesis en 10 páginas: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10
  • ANALISIS DE LOS EFECTOS DE LOS GLUCOCORTICOIDES SOBRE LA PROLIFERACIÓN CELULAR Y LA SINTESIS DE COLAGENO. ESTUDIO EXPERIMENTAL EN CULTIVO DE OSTEOBLASTOS HUMANOS .
    Autor: HERNÁNDEZ MIGUEL M. VICTORIA.
    Año: 2003.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: HOSPITAL CLINIC DE BARCELONA.
    Resumen: El objetivo de esta tesis doctoral fue estudiar los mecanismos celulares de la osteoporosis inducida por glucocorticoides. Se analizaron los efectos de dosis suprafisiológicas de desametasona (10-6M y 10-7M) sobre la proliferación celular y la función celular de osteoblastos humanos. El cultivo celular se estableció a partir de hueso trabecular humano obtenido de pacientes que precisaban colocación de una prótesis articular, excluendo aquellos con sospecha de osteoporosis. El análisis de la proliferación celular se realizó a través de la síntesis de DNA por la incorporación de timidina triatiada. La función celular se analizó estudiando la síntesis de procolágeno tipo I intracelular, por técnica de inmunocitoquímica utilizando un anticuerpo monoclonal antiprocolágeno I; así como la secreción de los propéptidos amino (PINP) y carboxi (PICP) terminal del procolágeno tipo I en el medio de cultivo por técnica de radioimmunoanálisis. Se valoraron los resultados a las 24 y 48 horas de incubación y se compararon con los del grupo control, sin adición de glucocorticoides. Se observó una disminución de la sintasa de procolágeno I intracelular en los cultivos de osteoblastos tratados con dexametasona (DEX) 10-6M a las 24c y 48 horas de incubación respecto al grupo control (32 +- 5% y 35 +- 6%, respectivamente) (p mayor 0.05), así como de la secreción de PINP y PICP en el sobrenadante a las 24 h (PINP: 20 +- 8%; PICP: 22 +- 10%) y 48h (PINP: 19 +- 5%; PICP: 14 +- 3%) (p mayor 0.05). No se hallaron diferencias significativas entre ambas concentraciones. Los niveles de PINP y de PICP se correlacionaron entre sí (r=0.827) y con la síntesis de procolágeno I intracelular (PINP r=0.515; PICP r= 0.486) (p mayor 0.001). Se observó un discreto incremento de la proliferación celular en relación con el tiempo de incubación que sólo fue significativo en el grupo control y en el de DEX 10-6M (p mayor 0.05). Las conclusiones de nuestro estudio fueron: los glucocorticoides a dosis suprafisiológicas producen una inhibición precoz de la función celular en osteoblastos humanos, no asociada a una disminución de la proliferación celular: la actividad osteoblástica en sobrenadante valorada mediante PINP y PICP se correlaciona directamente con la síntesis intracelular de procolágeno I y, como consecuencia, ambas determinaciones son útiles para analizar la función osteoblástica "in vitro".
  • ASPECTOS TEMPORALES Y SUSCEPTIBILIDAD DE LA RESPUESTA METABÓLICA .
    Autor: SÁNCHEZ TORRALBA ANTONIO.
    Año: 2003.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: QUÍMICA.
    Centro de realización: FACULTAD DE CC. QUÍMICAS.
    Resumen: Se define el tiempo de respuesta de sistemas metabólicos, tomando como fundamento la definición del tiempo característico de la transición de una variable metabólica, como un flujo o una concentración de un metabolito. Este objetivo general se ha realizado en tres etapas: 1,- Formalización de la respuesta metabólica como una transformación funcional entre una transición de entrada (excitación o estímulo) y una de salida. 2,- Elaboración de una algoritmo de caracterización de dicho funcional a partir de experimentos de perturbación de un estado metabólico mediante series de impulsos sucesivos. 3,- Propuesta de una definición general de función de respuesta, y a partir de ella, de tiempo de respuesta. El método sugerido es fenomenológico, esto es, se sustenta en observables y no exige conocimiento alguno ni de la estructura de la red ni de su cinética. Se ha propuesto caracterizar el funcional respuesta mediante una expansión en serie funcional de Taylor. Para ello es necesario determinar unas funciones, la susceptibilidades, mediante el algoritmo que se presenta, que se ha aplicado a modelos de una enzima de Michaelis irreversible, del catabolismo de la fructosa y de una red con autocatálisis. La aplicación de la definición desarrollada en el presente trabajo a estos y otros sistemas permite concluir que el tiempo de respuesta sólo coincide con el balance de masas cuando se cumplen tres condiciones: que la respuesta estudiada sea global, que la excitación sea monótona y que la función de respuesta no cambie de signo. Asimismo, el teimpo de respuesta no es una constante del sistema, salvo si éste es lineal e invariante con el tiempo. La definición también sugiere una nueva condición de validez de la hipótesis de estado cuasiestacionario en enzimas de Michaelis irreversibles. Por último, el tiempo de respuesta de una enzima alostérica se correlciona con el tiempo de transición de una de sus activadores: su producto.
  • EXPRESIÓN DE GLUCOQUINASA EN MÚSCULO ESQUELÉTICO: PAPEL EN LA CONTRARRESTACIÓN DE LA DIABETES MELLITUS .
    Autor: ONTIVEROS GONZÁLEZ MARIA.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: VETERINARIA.
    Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.
    Resumen: La diabetes mellitus es una enfermedad metabólica muy frecuente, que comprende una gran variedad de síndromes con diferentes etiologías y que afecta en total a un 2-7% de la población mundial. Esta enfermedad se caracteriza, básicamente, por una hiperglucemia debido a la falta de insulina o a una alteración en la acción de la hormona. En nuestro laboratorio estamos desarrollando aproximaciones para reducir la hiperglucemia diabética mediante la manipulación de tejido sextrapancreáticos con el fin de que capten glucosa. El músculo esquelético es el principal tejido implicado en la captación de glucosa sanguinea después de una ingesta, eliminado alrededor del 75% del azucar. El tejido muscular capta glucosa por difusión facilitada de forma dependiente e independiente de la insulina. Por tanto, como consecuencia de la falta de insulina en la diabetes de tipo 1 o de la resistencia a la hormona en la diabetes de tipo 2, el musculo esquelético es incapaz de captar glucosa de la sangre. En nuestro laboratorio se habían generado ratones transgénicos que expresan la enzima hepática glucoquinasa en músculo esquelético. Estos ratones presentan un incremento en la captación y utilización de la glucosa, pero permanecen hiperglucémicos en alimentación tras un tratamiento con STZ. Esto podría ser debido a una alteración en el transporte de la glucosa hacia el interior de la célula muscular. Así, en este trabajo hemos obtenido ratones transgénicos que expresan ambos, el transportador GLUT2 y la enzima GK, en músculo esquelético, con la finalidad de incrementar el transporte y la fosforilación de glucosa. Esto se realizó para estudiar si la coexpresión de estas dos proteínas resultaba en una normalizacón de la hiperglucemia diabética. Sin embargo, los resultados obtenidos indican que la expresión de GLUT2 en músculo esquelético de ratone sMLC/GK tratados con STZ no mejora los resultados obtenidos con ratones que expresan únicamente GK en músculo. En cambio, y contrariamente a los ratones control diabéticos, hemos demostrado que pequeñas dosis de insulina exógena permiten alcanzar una normalización de la glucemia en animales diabéticos que expresan GK en músculos esquelético. Por otro lado, también se han manipulado células musculares en cultivo para que expresen la enzima GK y estudiar si el trasplante de estas células a ratones tratados con STZ permite conseguir una contrarrestación o una prevención de la hiperglucemia diabética. Los resultados presentados en esta memoria muestran que los mioblastosC2C12 que expresan GK presentan un incremento en la captación de glucosa de forma dependiente de la concentración extracelular del azúcar. Así, cuando estas células son transplantadas a ratones tratados con STZ, los animales presentan una disminución de la hiperglucemia diabética debido a un incremento en la aceptación y utilización de la glucosa por parte del implante. Por tanto, esto podría constituir una aproximación ex vivo para incrementar la eliminación de glucosa sanguínea en la diabetes de tipo 1. Las causas de la aparición de diabetes de tipo 2 todavía son desconocidas, pero se cree que interaccionan la susceptibilidad genética y una serie de factores ambientes, principalmente la dieta y la fatla de actividad física. En el presente estudio hemos investigado el efecto de la expresión de GK en músculo esquelético de ratones modelos de resistencia a la insulina. Para llevarlo a cabo hemos utilizado dos aproximaciones diferentes: por un lado, se ha expresado GK en músculo esquelético de un modelo de resistencia a la insulina obtenido por combinación parcial de IRS-1 (IRS-1+/-), junto con una dieta de alto contenido en lípidos. Por otro lado, se ha electrotransferido in vivo el gen de la GK a músculo esquelético de animales IRS-1-/-, un modelo de resistencia a la insulina sin obesidad previamente descrito y caracterizado (Araki, 1994; Tamemoto, 1994). Así, los resultados obtenidos en esta parte del estudio sugieren que la expresión de GK en músculo esquelético permitiría una mejoría en la sensibilidad a la insulina en estos dos modelos de resistencia a la hormona. Por tanto, la expresión de GK en músculo esquelético también podría resultar una buena aproximación para incrementar la captación de glucosa y mejorar la sensibilidad a la insulina en la diabetes de tipo 2.
  • ESTRÉS OXIDATIVO EN LA FENILCETONURIA .
    Autor: COLOMÉ MALLOLAS CATRINA.
    Año: 2002.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGIA.
    Centro de realización: FACULTAT DE BIOLOGÍA.
    Resumen: En estos últimos años se han acumulado diferentes evidencias, tanto en animales de experimentación como en humanos, de la existencia de un cierto aumento del estrés oxidativo en la fenilcetonuria. El sistema nervioso, primordialmente afectado en la fenilcetonuria, es extremadamente sensible al estrés oxidativo debido a su alto consumo de oxígeno, el alto contenido en hierro y lípidos (especialmente ácidos poliinsaturados) i la baja capacidad del sistema antioxidante, tal como se ha demostrado en otras enfermedades (epilepsia, esclerosis múltiple, demencia …). Por tanto, un exceso de producción de radicales libres o un defecto en la síntesis de sustancias antioxidantes podría relacionarse con las alteraciones neurológicas observadas en la fenilcetonuria. El objetivo principal de esta tesis doctoral es estudiar el sistema antioxidante y su relación con el control metabólico-nutricional y con el estrés oxidativo en los pacientes fenilcetonúricos. Se estudiaron 65 pacientes fenilcetonúricos (media 15,3 años (rango 3-37); 39 pacientes con hiperfenilalaninemia moderada (media 8,7 años (rango 3-17) y 66 controles (media 16 años (rango 1-38). Se determinaron loa minoácidos, homocisteína, glutatión, retinol, tocoferol, ácido ascórbico, malondialdehido en plasma; colesterol total, HDL, LDL, triglicéridos, ubiquinona, folato, cobalamina y selenio; las actividades de la glutatión peroxidas, glutatión reductasa, superóxido dismutasa y catalasa en eritrocitos; y la ingesta diaria de colesterol y lípidos totales por medio de una encuesta dietética. Los resultados de nuestro estudio confirman que un elevado porcentaje de pacientes fnilcetonúricos muestran una deficiencia plasmática de ubiquinona. Esta deficiencia está principalmente relacionada con dos factores: en primer lugar, con las elevadas concentraciones de fenilalanina y, en menor grado, con la baja ingesta de colesterol. En nuestros pacientes se demuestran unas bajas concentraciones de colesterol, que también están relacionadas con las elevadas concentraciones de fenilalanina, aunque la baja ingesta de colesterol de estos pacientes también es un factor determinante. El índice de control de la dieta (calculado a partir de la media de las medianas de las concentraciones plasmáticas de fenilalanina de cada seis meses), muestra una relación más estrecha que los valores puntuales de fenilalanina, tanto con elevadas concentraciones de ubiquinona como con las de colesterol, ya que refleja mejor el control metabólico a largo término. La concentración de ubiquinona intracelular (en linfocitos) también está disminuida en estos pacientes. Estos valores deficientes se asocian a las concentraciones de fenilalanina en plasma. El hecho que la concentración intralinfocitària de ubiquinona dependa básicamente de su síntesis endógena refuerza la hipótesis de una inhibición de esta síntesis por la fenilalanina. Las elevadas concentraciones de malondialdehido observadas en los pacientes fenilcetonúricos indican un aumento de la peroxidación lipídica y, por tanto, del estrés oxidativo en estos pacientes, incluso en los bien controlados. El selenio no está directamente implicado en el aumento del estrés oxidativo en nuestros pacientes, ya que están suplementados y, aunque las concentraciones en plasma están disminuidas, la actividad de la glutatión peroxidasa es normal, sugiriendo que el suplemento es efectivo. Las concentraciones de tioles plasmáticos (homocisteína, cisteína y glutatión) son adecuadas y no tendrían una implicación en el aumento del estrés oxidativo en la fenilcetonuria, actuarían posiblemente de factor protector. Los pacientes del malondialdehido, comparados con otros grupos. Esto indica que la deficiencia de ubiquinona puede ser el factor principal asociado al estrés oxidativo en nuestros pacientes.
  • FUNCIÓN DE LA GLUCOSA-6-FOSFATO DESHIDROGENASA EN LA NEUROPROTECCIÓN FRENTE AL ESTRÉS NITROSATIVO .
    Autor: GARCÍA NOGALES PAULA.
    Año: 2002.
    Universidad: SALAMANCA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: DPTO. BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR.
    Resumen: El óxido nítrico (NO) es un radical libre, altamente difusible y de corta vida media que desempeña diversas e importantes funciones biológicas. Sin embargo, en ciertas condiciones patológicas, la síntesis excesiva de óxido nítrico (estrés nitrosativo) da lugar a la inmediata reacción de este radical con el anión superóxido para formar el anión peroxinitrito (ONOO-). Tanto el óxido nítrico como el peroxinitrito son potentes agentes oxidantes su sulfhidrilos, y, por tanto, del antioxidante mayoritario glutatión. La capacidad celular para mantener la concentración intracelular de glutation en su forma reducida parece ser determinante para la supervivencia celular en condiciones de estrés nitrosativo. En base a los estudios realziados con anterioridad, la idea universalmente extendida es que el peroxinitrito es el derivado neurotóxico del óxido nítrico. Sin embargo, los resultados presentados en esta Tesis ponen de manifiesto por vez primera que la producción de peroxinitrito no está necesariamente asociada a la muerte neuronal por estrés nitrosativo. Al contrario, nuestros resultados demuestran que a concentraciones compatibles con las fisiológicas y, al menos de modo transitorio, el peroxinitrito protege a las neuronas frente al daño causado por el exceso de óxido nítrico. Además, en este trabajo se demuestra que la utilización de glucosa a través del ciclo de las pentosas fosfato representa una vía metabólica esencial en dicha protección. Así, la actividad de la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD), enzima limitante de dicho ciclo, se activa por peroxinitrito, tanto exógeno como endógeno, lo que causa un aumento en la producción de NADPH que proprociona el poder reductor necesario para la regeneración del glutatión. De esta forma, proponemos que la formación de peroxinitrito podría representar una nueva señal de alarma asociada al estrés nitrosativo encargada de activar este potente sistema antioxidante endógeno destinado a la prevención del daño neuronal. Por otro lado, los resultados obtenidos en este trabajo demuestran también que el incremento en la actividad de la G6PD, bien sea transcripcionalmente o mediante la activación directa de la enzima, constituye un mecanismo de defensa frente a los efectos tóxicos del óxido nítrico. Es más, la modulación génica de la expresión de la G6PD nos ha permitido confirmar la relación directa existente entre la actividad de la enzima, la concentración de NADPH y la resistencia celular frente a la apoptosis mediada por óxido nítrico, poniendo así de manifiesto la importante función de la G6PD en la denfesa neuronal frente al estrés nitrosativo. Futuras investigaciones serán necesarias para conocer la importancia relativa de este mecanismo en la defensa cerebral frente a las condiciones de excesiva síntesis de oxido nítrico que se dan en ciertas enfermedades neurodegenerativas.
  • EL METABOLISMO ENERGÉTICO DEL MÚSCULO. EFECTO DEL DESARROLLO CORPORAL Y DE LOS HÁBITOS DE EJERCICIO SOBRE EL DISEÑO Y FUNCIONAMIENTO DE LA GLICOLISIS, Y SU INFLUENCIA EN LA ESTRUCTURA DEL MÚSCULO .
    Autor: MELÉNDEZ MORALES DAVID.
    Año: 2002.
    Universidad: LA LAGUNA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR .
    Resumen: El trabajo presentado realiza un estudio detallado sobre la evolución en el tiempo del metabolismo energético del músculo en palomas mensajeras; a trvés de la medida de la actividad de la ruta metabólica de la glucolisis completa, así como de la primera parte. La tesis demuestra como el cambio macroscópico que se produce en el músculo va ligado a un cambio en el metabolismo energético, desde anaeróbico a aeróbico; cambio que viene condicionado por el tipo de ejercicio llevado a cabo y que puede ser reversible. Así mismo, en la tesis se comprueba que la separación electroforética de las isoenzimas de la láctico deshidrogenasa son un buen marcador de la predisposición genética de los músculos para desarrollar un determinado tipo de metabolismo. El trabajo presenta las posibles aplicaciones de los resultados obtenidos al mundo del deporte, en concreto al del fútbol.
  • CARACTERIZACIÓN DE UN MODELO TRANSGÉNICO DE DIABETES AUTOINMUNE. PAPEL DE LA EXPRESIÓN PANCREÁTICA DE IGF-I EN LA PREVENCIÓN DE LA RESPUESTA INFLAMATORIA .
    Autor: CASELLAS COMALLONGA ALBA .
    Año: 2002.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: VETERINARIA.
    Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.
    Resumen: La diabetes tipo 1 es el resultado de la destrucción autoinmune de las células beta pancreáticas. En islotes de pacientes diabéticos tipo 1 se ha detectado la presencia de interferón beta (IFNbeta). Ratones transgénicos que expresan IFNbeta humano en las células beta obteniendo en nuestro laboratorio presentan alterada la secreción de insulina y son más susceptibles a desarrollar diabetes. Estos ratones presentan una buena viabilidad y se reproducen con facilidad. Tras la administración de dosis muy bajas de STZ (15-20 mg/Kg peso), que no afectan a los ratones control, los ratones transgénicos presentan un incremento crónico de la glucémia y una gran infiltración linfocitaria en sus islotes, con presencia de linfocitos T CD4+ y CD8+. Esto lleva a la destrucción de las células beta por un proceso apoptótico. Los resultados indican que los ratones transgénicos que expresan IFNbeta en células beta podrían ser un buen modelo para desarrollar protocolos de terapia génica o de terapias convencionales para la diabetes tipo 1. El factor de creimiento similar a la insulina de tipo I (IGF-I) estimula la proliferación y la diferenciación de las células beta y es un potente fator antiapoptótico. Ratones transgénicos que expresan IGF-I específicamente en las células beta del páncreas (RIP/IGF-I), obtenidos en nuestro laboratorio, presentan una recuperación en la masa de células beta después de la inducción de diabetes experimental mediante tratamiento con STZ. Con el objetivo de determinar el papel de IGF-I en la contrarrestación de la diabetes autoinmune hemos generado animales dobles transgénicos IFNbeta/IGF-I. Los resultados indican que la producción local de IGF-I protege a las células beta de la destrucción mediada por el sistema inmune y contrarresta la diabetes experimental inducida por STZ, nomalizandose la glucemia, insulinemia y la masa de células beta. Por tanto, la transferencia del gen IGF-I a páncreas podria ser una buena terapia para la diabetes tipo 1.
  • MECANISMOS NEURONALES DE TRANSDUCCION DE SEÑALES Y DE MUERTE CELULAR INDUCIDOS POR HEXACLOROCICLOHEXANOS Y BIFENILOS POLICLORADOS.
    Autor: SANCHEZ ALONSO JESUS ADOLFO .
    Año: 2002.
    Universidad: ALCALA.
    Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: El insecticida lindano (g-hexaclorociclohexano) y los bifenilos policlorados son compuestos organoclorados persistentes que tienen, entre otros, efectos neurotóxicos. El objetivo de esta tesis fue estudiar los mecanismos de transducción de señales y de muerte celular inducidos por estos compuestos en la corteza cerebral, utilizando para ello microprismas de corteza cerebral y cultivos primarios de neuronas. Las conclusiones obtenidas con respecto al lindano fueron: 1. El lindano estimula en corteza cerebral la hidrólisis de los fosfoinosítidos, para dar inositoles fosfato en general, e I(1,4,5)P3 en particular. 2. En dicha estimulación, no participan los receptores muscarínicos del tipo M1, M3 y M5, ni los receptores a1-adrenérgicos. 3. Es posible que estén implicados receptores o canales que favorezcan la entrada de Ca2+ extracelular, hecho éste que activaría PLC y aumentaría los niveles de inositoles fosfato. Y las conclusiones obtenidas respecto a los PCB fueron: 1. Los PCB disminuyen la viabilidad celular en los cultivos primarios de neuronas, de manera tiempo- y concentración-dependiente. En este sentido, Aroclor 1248 es más citotóxico que Aroclor 1260, y CB 77 lo es más que CB 153. 2. Dicha pérdida de viabilidad celular es en gran parte debida a la muerte celular de tipo apoptótico, lo que se deduce de los cambios morfológicos observados, de la fragmentación internucleosomal del DNA, de la activación de caspasa-3 y de las variaciones en la razón Bcl-2/Bax. 3. La apoptosis inducida por Aroclor 1248 es de mayor intensidad que la debida a Aroclor 1260, y la producida por CB 77 es más acusada que la que se origina por la presencia de CB 153 en el medio de cultivo. 4. De todo lo anterior, se deduce que los PCB con afinidad por AHR y con menor grado de cloración son más citotóxicos y más apoptogénicos, en nuestras condiciones experimentales. 5. Los PCB dioxínicos (planares) son, como tradicionalmente se pensaba, neurotóxicos; pero también lo son los no dioxínicos (no planares). Por tanto, diferentes mecanismos estarán implicados en la muerte neuronal producida por PCB; unos serán dependientes y otros independientes de AHR.
  • PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN GENÉTICA Y MOLECULAR DE LIPASAS DE CANDIDA RUGOSA .
    Autor: PERNAS CARRALERO M. ANTONIA.
    Año: 2002.
    Universidad: VIGO.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS DE OURENSE.
    Resumen: Las lipasas son una familia de enzimas que catalizan la hidrólisis de triglicéridos con diferentes tipos de especificidad (y capacidad para reacciones de síntesis), lo que les confiere, especialmente a las de origen microbiano, un potencial industrial en los sectores alimentarios y farmacéutico. Candida rugosa posee al menos 7 genes que codifican (con alguna excepción al código genético universal) otras tantas lipasas cuya purificación, caracterización y cristalización no ha sido posible en todas ellas. Precisamente, los costes de producción y la disponibilidad de formas puras ha limitado hasta ahora la extensión de los usos y la comprensión de las relaciones estructura-actividad. El presente trabajo que comprende la purificación y caracterización (bioquímica y cinética) de las lipasas de Candida rugosa presentes tanto en un extracto comercial como en un postincubado producido ad hoc, forma parte d eunproyecto más amplio que integra estos aspectos junto con los de producción a escala piloto y aplicación en reacciones de química fina. De este modo, se ha resuelto, partiendo de las fuentes indicadas y proponiendo diferentes alternativas operatorias, la purificación de las lipasas Lip1, Lip2 y Lip3 (esta última en forma de monómero y dímero) en cantidades suficientes como para permitir comparar de forma sistemática sus propiedades y, en el caso particular de Lip2, su cristalización. Así, a pesar de su similitud en cuanto a valores de peso molecular, punto isoeléctrico y grado de glicosilación, las enzimas mostraron diferencias en la especificidad de sustrato, especialmente significativas frente a la longitud de cadena de triglicéridos y en la estabilidad frente al efecto combinado del pH y la temperatura, siendo las más termoestables Lip2 y Lip3 dimérica. También el comportamiento cinético fue diferente. Mientras Lip3 dimérica mostró perfiles prácticamente michaelianos como consecuencias de la mayor accesibilidad del sustrato al centro activo en la disposición que presentan los monómeros en el dímero, las otras mostraron el característico comportamiento sigmoidal de las lipasas, con una gradaciónen la relación de actividades lipasa/estearasa coherente con la facilidad relativa de cada una de ellas a mostrarse en la conformación abierta. Posteriormente, el estudio de las cinéticas de inhibición permitió estudiar las transiciones entre las conformaciones cerrada y abierta de las lipasas, proceso que se acelera en presencia de interfases no catalíticas y evidenciándose la existencia de un porcentaje de moléculas (mayoritario en Lip2) en conformación abierta aún en ausencia de interfases. Todas las propeidades funcionales descritas y, de modo más concreto las referidas al balance lipasa/estearasa, tienen su correlato estructural -a pesar de la gran homología tridimensional existente entre ellas- en, por una parte, las diferencias que la estructura primaria impone en la flexibilidad de la tapadera, y por otra, en las distintas hidrofobicidad de la región catalítica en función del balance entre aminoácidos aromáticos y alifáticos en dicha cavidad. Así, la mayor rigidez conformacional de la tapadera de Lip1 se relaciona con la mayor dependencia de interfases activantes y, consecuentemente, explica su mayor carácter lipásico. Del mismo modo, Lip2 y Lip3 presentaron una cavidad catalítica más hidrofóbica que Lip1.
  • CAMBIOS EN LA SENSIBILIDAD A LA INSULINA DURANTE EL ENVEJECIMIENTO DE LA RATA WISTAR. ALTERACIONES DE LAS VIAS LIPOGENICAS Y LIPOLITICAS EN EL TEJIDO ADIPOSO PERRIRRENAL .
    Autor: FERMIN RODRÍGUEZ YASMIN COROMOTO.
    Año: 2001.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: CENTRO DE BIOLOGÍA MOLECULAR SEVERO OCHOA.
    Resumen: El presente trabajo está orientado al estudio de la acción de la insulina en la rata y su deterioro con el envejecimiento, que se manifiesta en el desarrollo de resistencia periférica a la acción de la hormona. El presente trabajo aborda el análisis de los efectos lipogénicos y antilipolíticos de la insulina en adipocitos aislados de rata Wistar de entre 3 y 24 meses de edad, así como la búsqueda de posibles alteraciones concretas con la edad en las vías de señalización hormonal que regulan dichas funciones metabólicas. Por otra parte, el presente trabajo persigue evaluar la influencia de la adiposidad sobre la resistencia global a la insulina, y discernir entre el efecto del envejecimiento como tal y el asociado a la mencionada adiposidad. Habiéndose encontrado que: En la rata Wistar la actividad lipolítica de los adipocitos disminuye con la edad. Esta disminución es observable tanto en condiciones basales como tras la estimulación con isoproterenol. La menor actividad lipolítica no es debida a un acoplamiento deficiente de la señal estimuladora con la actividad adenilato ciclasa, mediada por la proteína Gs, ni a una mayor sensibilidad de la adenilato ciclasa a los estímulos inhibidores mediados por la proteína Gi. Igualmente, la actividad adenilato ciclasa total tampoco se encuentra modificada con la edad. Sin embargo, el envejecimiento está asociado a una mayor presencia de proteína Gi-3 que podría ser responsable de una mayor inhibición tónica de la adenilato ciclasa, y a una expresión deficiente de la HSL. Estas dos alteraciones podrían explicar, al menos en parte, la disminución de la actividad lipolítica. Los efectos antilipolíticos de la insulina y del vanadato son plenamente funcionales en adipocitos de ratas viejas. Los datos sugieren un componente mediado por la vía de MAPK en la acción antilipolítica de ambos efectores que sólo se pone de manifiesto cuando la lipólisis es estimulada por forskolina. La insulina estimula la incorporación de glucosa en el glicerol de triglicéridos mediante un mecanismo dependiente de PI3K y de MAPK. Dicha incorporación se encuentra disminuida en adipocitos de ratas viejas en consonancia con la menor estimulación por insulina tanto de PI3K como de MAPK observada previamente. El vanadato, actuando por una vía independiente del receptor de insulina, estimula la incorporación de glucosa en el glicerol de triglicéridos mediante un mecanismo dependiente de PI3K y de MAPK similar al utilizado por la insulina. En adipocitos de ratas viejas el vanadato induce una estimulación superior a la insulina pero inferior a la observada en adipocitos de ratas jóvenes. Estos datos sugieren la existencia de alguna disfunción en la señal de la insulina en algún paso posterior a la estimulación de la PI3K, de la MAPK o de además, que no puede ser revertida mediante la estimulación con vanadato. La insulina y el vanadato estimulan la síntesis de ácidos grasos en un proceso dependiente de PI3K y de MAPK. Sin embargo, la insulina es sensiblemente más eficaz en dicha estimulación lo que sugiere la necesidad de algún componente propio de la señal de insulina escasamente estimulable por vanadato. Los adipocitos de ratas viejas muestran resistencia a insulina respecto a su efecto sobre la síntesis de ácidos grasos, y el vanadato carece de efecto sobre dicha síntesis. Durante el envejecimiento la rata mantiene tolerancia normal a la glucosa gracias a una mayor secrección de insulina, lo que implica la existencia de resistencia global a la hormona. La restricción nutricional durante 3 meses mejora la sensibilidad global a la insulina en las ratas de 8 meses pero no en las de 24 meses, aunque provoca una disminución de la adiposidad de similar magnitud de ambos grupos de animales. La sensibilidad a la estimulación por insulina de la actividad lipogénica de los adipocitos mejora tanto en ratas de 8 meses como en las de 24 meses, siendo mayor en el primer caso. La restricción parece inducir mejoras en la sensibilidad a la insulina en tejidos específicos de la rata vieja y no de un modo generalizado.
  • TOXICIDAD INDUCIDA POR ETANOL Y ANTIINFLAMATORIOS NO ESTEROIDEOS. EN UN MODELO EXPERIMENTAL DE GLÁNDULAS GÁSTRICAS AISLADAS DE CONEJO: MECANISMOS IMPLICADOS .
    Autor: SALVATELLA LEZCANO MARIA.
    Año: 2001.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: MEDICINA.
    Resumen: La finalidad de la primera parte de este estudio era investigar cual de los cambios metabólicos provocados por el etanol en nuestro modelo experimental de glándulas gástricas aisladas de conejo estaba más relacionado con su efecto inhibidor sobre la secreción de ácido. El etanol (1-20%, v/v) causó una redución, dependiente de la concentración ensayada, en la formación de ácido basal y estimulada por forskolina siendo la EC50 de 4,5 y 3,5%, respectivamente. El etanol también causó una reducción en el contenido glandular de ATP (EC50: 8,8%) y en los niveles de AMPc basales y estimulados por forskolina. En microsomas de glánculas gástricas inhibió la actividad hidrolítica de la H+, K+ -ATPasa (EC50: 8,5%) y dañó el transporte de protones, tanto dependiente de H+, K+ -ATPasas (EC50: 3%) como pasivo (EC50: 7,9%). Así, la inhibición de la secreción de ácido observada a bajas concentraciones de etanol (7%). En la segunda parte del estudio investigamos la influencia que los AINEs ácido acetilsalicílico, indometacina, diclofenaco y piroxicam ejercen sobre glándulas gástricas aisladas de conejo, analizando su acción sobre la secreción de ácido y sobre algunos de los procesos metabólicos implicados en el mecanismo de acoplamiento estimulo-secreción. El ácido acetilsalicílico y la indometacina no afectaron la secreción basal de ácido ni los niveles de ATP o AMPc, así como tampoco modificaron la actividad hidrolítica de la H+, K+ -ATPasa ni el transporte de protones dependiente de esta enzima. Por el contrario, el piroxicam y el diclofenaco alteraron numerosos procesos de un modo dependiente de la concentración ensayada. Así redujeron la secreción de ácido basal (EC50: 280 y 138 uM) y estimulada por histamina (EC50: 210 y 100 uM) y disminuyeron los niveles glandulares de ATP (EC50: 361 y 254 uM) y de AMPc. También provocaron una disminución de la actividad hidrolítica de la H+, K+ -ATPasa (EC50: 333 y 405 uM) y del transporte de H+ dependiente de esta enzima (EC50: 183 y 300 uM). Por último, aumentaron la permeabilidad pasiva de protones a través de las membranas microsomales (EC50: 590 y 290 uM). Estos datos nos indican que el piroxicam inhibe la secreción basal de ácido actuando, principalmente, a través de la disminución de la capacidad de transporte de protones dependiente de la H+, K+ -ATPasa. La acción inhibidora del diclofenaco, a concentraciones superioes a 250 uM, sobre la formación basal de ácido se ejercería a través de la alteración de todos los procesos celulares estudiados.
  • CARACTERIZACIÓN DEL SISTEMA ENDOTELINA EN LA PLACA ATEROMATOSA DE ARTERIA CARÓTIDA Y SU EXPRESIÓN EN EL CORAZÓN EN FALLO .
    Autor: BERNAL LÓPEZ M. ROSA.
    Año: 2001.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: La Endotelina-1 (ET-1) es un péptido con un potente efecto vasoconstrictor, mayor que el de cualquier otra sustancia hasta ahora conocida y podría estar implicada en el desarrollo de complicaciones asociadas a la aterosclerosis en el sistema cardiovascular entre otros órganos. La ET-1 es capaz, además de otras funciones, de inducir proliferación celular y síntesis de proteínas de matriz en células de músculo liso vascular, fibroblastos y cardimiocitos en cultivo, entre otro tipos celulares. Además tiene efectos inotrópicos y cronotrópicos positivos en corazón aislado. Sin embargo, su implicación en la fisiopatología cardiovascular no está clara. Nuestro objetivo global ha sido la caracterización del sistema Endotelina en la placa ateromatosa de arteria carótida y su expresión en el corazón en fallo. Los pacientes con aterosclerosis acelerada tenían, en conjunto, uno niveles plasmáticos de ET-1 superiores a los que presentaban los sujetos controles sanos. En la placa carotídea, existe gran cantidad de ET-1, principalmente, en CMLV y áreas de infiltración de macrófagos, y un aumento significativo de los niveles de expresión del ARNm de la ppET-1 y su receptor ET A. En la aurícula izquierda, tanto de corazones de donantes sanos como de pacientes diagnósticados de cardiomiopatía isquémica y sometidos a trasplante cardiaco, se encuentran los dos tipos de receptores de ET-1, siendo más abundante el receptor ET A que el receptor ET B. En las aurículas de los pacientes existe un mayor número de receptores totales, aunque se mantienen las proporciones de cada uno de éstos localizándose en endocardio, miocardio y epicardio, siendo el miocardio la capa donde se concentra el mayor número de ambos tipos de receptores. En resumen, nuestros resultados permiten ahondar en la función del sistema ET implicado en la fisiopatología de la aterosclerosis avanzada, demostrando que la ET-1 es marcador de aterosclerosis y se relaciona directamente con el grado de afectación de la aterosclerosis del paciente. En pacientes con CMI, la ET-1 pdoría ejercer una función importante en la remodelación del corazón a través de la activación de su receptor ET A.
  • EFECTO HIPOLIPEMIANTE DEL ACEITE DE PESCADO EN POLLOS NORMO E HIPERCOLESTEROLÉMICOS.
    Autor: AMALIK FATIMA.
    Año: 2000.
    Universidad: GRANADA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.
    Resumen: La sustitución de ácidos grasos saturados (aceite de coco) por insaturados de la serie n-3 (aceite de pescado) provoca la reversión de la hipercolesterolemia, lo cual tiene una gran improtancia para el tratamiento de las enfermedades cardiovasculares. Los efectos de esta sustitución se manifestan también a nivel de todas las lipoporteínas plasmáticas, de sus apoproteínas mayoritarias y de los ácidos grasos plasmáticos, todos los cuales diminuyen significativamente. Las distinas modificaciones observadas en las VLDL, corroboran su importancia en el transporte del colesterol en pollos y sugieren que este tipo de grasa insturada produce su rápida conversión en LDL y/o su absorciónpor el hígado. A nivel de los ácidos grasos particulares, destaca la disminución del contenido y porcentaje del ácido araquidónico, tanto en plasma como en las distinas liproteínas y, más concretamente, en sus fosfolípidos, donde es más abundante. Esta diminución puede influir por otro mecanismo (reducción de la producción de eicosanoides) sobre la evolución forable de las enfermedades caridovasculares.
  • "MARCADORES BIOQUÍMICOS DE LA ACTIVACIÓN PLAQUETARIA; ANÁLISIS MULTIPARAMÉTRICOS POR CITOMETRÍA DE FLUJO".
    Autor: RODRIGUES MONTEIRO M. DO CEU.
    Año: 2000.
    Universidad: VALENCIA.
    Centro de lectura: MEDICINA .
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGIA-UNIVERSITAT DE VALÉNCIA.
    Resumen: La activación plaquetaria desempeña un papel fundamental en la fisiopatología de la hemostasia. Por esa razón, el estudio de marcadores bioquímicos tempranos de activación plaquetaria puede ser relevante para evaluar la activación de las plaquetas "in vivo" y las alteraciones de la reactividad asociadas a disfunciones de la hemostasia. El objetivo del trabajo consistió en desarrollar y valdiar métodos por citometría de flujo que permitan analizar en muestras de sangre humana entera, diversos eventos bioquímicos iniciales implicados en las respuestas plaquetaria. Para identificar la población plaquetaria se utilizó el anticuerpo monoclonal frente a laglicoproteina constitutiva GPIIb/Iia CD41 y se marcaron los eventos bioqúmicos confluorocrmos sensibles al calcio (Fluo-3), actina polimerizada (Faloidina-FITC), pH (BCECF), potencial de membrana plasmático (Bis-Oxonol), y exposiciónde fosfolípidos aniónicos (anexina-V-FITC). Los ensayos consisten en la medida de la variación de las fluorescencias específicas enla poblaciones seleccionada DC41(+) tras la adición de agonistas fuertes (Trombina) o débiles (ADP). Los datos muestran que los ensayos cinéticos por citometría de flujo implican un grado mínimo de manipulación y son útiles en el análisis de señales de activación plaquetaria, en la detección de plaquetas activadas circulantes y en el control de la terapia de la hemostasia.
  • ALTERACION DE RUTAS METABÓLCIAS Y PROMOCIÓN DE DEFENSAS ENDOGENAS EN LYCOPERSICUM ESCULENTUM MILL CAPSIUM ANUUM L.INDUCIDAS POR LA APLICACIÓN DE NUEVOS REGULADORES DE CRECIMIENTO .
    Autor: FLORS HERRERO VICTOR.
    Año: 2000.
    Universidad: JAUME I DE CASTELLON.
    Centro de lectura: TECNOLOGIA Y CIENCIAS EXPERIMENTALES.
    Centro de realización: ESCUELA SUPERIOR DE TECNOLOGIA Y CIENCIAS EXPERIMENTALES .
    Resumen: Las prácticas agronómicas actuales han derivado en un uso abusivo de hormonas sintéticas y pesticidas que han inducido resistencias en los patógenos dificultando cada vez más su erradicación. Por eso es importante desarrollar nuevos reguladores del crecimiento vegetal que promuevan efectos beneficiosos en los cultivos y ayuden a mejorar la sanidad de los cultivos. El objeto de esta tesis ha sido desarrollar nuevos reguladores del crecimiento vegetal basados en radicales de hormonas naturales los cuales poseen actividad bioestimulante por si solos. Con esta finalidad se han diseñado tres tratamientos que contienen varios compuestos en solucion acuosa: 1)ester etilico del acido adipico, a la 1,2,3,4 tetra-O-acetil D-glucopiranosa y la fufurilamina, 2)adipato de etilo y 1,2,3,4, tetra-O-acetil D-glucopiranosa y fufurilamina y 3) adipato de etilo y 1,2,3,4 tetra-O-acetil D-glucopiranosa y 1,3 diaminopropano. Para desarrollar esto objetos se han realizado experimentos en los que se ha comprobado la capacidad de estos nuevos reguladores del crecimiento para estimular el metabolismo de las plantas de pimiento y tomate. También se ha estudiado la posible inducción de defensas activas y constitutivas de los vegetales y el potencial antifúngico de estos tratamientos cuando son aplicados sobre hongos patógenos. Los resultados han demostrado el potencial bioestimulante de los tres tratamientos diseñados así como la capacidad para inducir defensas endógenas de los vegetales reduciendo el ataque de hongos fitopatógenos y también se ha comprobado que tienen un elevado potencial fungicida.
  • SEÑALES INTRACELULARES IMPLICADAS EN EL TRANSPORTE DE GLUCOSA ESTIMULADO POR SULFONILUREAS .
    Autor: RODRIGUEZ LÓPEZ ESTHER.
    Año: 2000.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: BIOLOGIA.
    Centro de realización: FUNDACIÓN JIMENEZ DIAZ.
    Resumen: Las sulfonilureas son los hipoglucemiantes orales más ampliamente utilizados en el tratamiento de la diabetes mellitus tipo 2. Además de su efecto pancreático estimulando la secreción de insulina se ha descrito un efecto extrapancreático. En estudios previos comprobamos que la gliclacida, sulfonilurea de segunda generación, estimulaba la captación de glucosa en músculo esquelético de extremidades inferiores de ratas normales de forma directa e innediata promoviendo la translocación del gluco transportador GLUT4 a la membrana plasmática.El objetivo de nuestro estudio está encaminado a conocer la vía de señalización intracelular de la gliclacida para inducir el transporte de glucosa. Para ello analizamos el efecto de la gliclacida sobre distintas enximas implicadas en la vía de señalización intracelular de la insulina. Los estudios se desarrollaron en el músculo soleo de rata aislado y clampado incubado in vitro congliclacida. Se obtuvieron los siguientes resultados: 1,- La gliclacida induce la activación de la enzima P13K (fosfatidilinositol3-quinasa) asociada a IRS-1 (sustrato del receptro de insulina) y dicha activación es necesaria para el transporte de glucosa estimulado por gliclacida. 2,- La gliclacida produce la activación de IRS-1 induciendo su fosforilación en residuos tirosina. 3,- La gliclacida produce la translocación de las isoformas de PKC (proteína quinasa C) ---- dependientes de DAG (diacilglicerol) desde la fracción citosólica a la fracción de membrana de una forma gradual no bifásica como se demostró con insulina. 4,- La activación de PKC es necesaria para el transporte de glucosa estimulado por fliclacida. 5,- La activación de las tres isoformas analizadas es dependiente de la activación de la P13K. 6,- La activación de estas isoformas de PKC por gliclacida es dependiente de la actividad PLCy (fosfolipasa C). 7,- El transporte de glucosa estimulado por gliclacida ocurre a través de la actividad PLCy. Con los resultados obtenidos nosotros plantemaos una vía de señalización hipotética en la que la gliclacida estimularía la fosforilación en tirosina de IRS-1, lo que permitiría su asociación con la enzima P13K induciendo la activación de esta última. Los productos de la P13K provocarían la activación de PLCy cuya actividad hidrolizante incrementaría los niveles de DAG responsable de la activación/translocación de las isoformas PKCa O y e necesaria para le transporte del glucosa.
  • OBSTRUCCIÓN BILIAR Y ESTRÉS OXIDATIVO EN RATAS: EFECTO DE LA ADMINISTRACIÓN DE MELATONINA Y S-ADENOSIL-L-METIONINA .
    Autor: CABRERA SÁNCHEZ EMILIO.
    Año: 2000.
    Universidad: CORDOBA.
    Centro de lectura: MEDICINA .
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: Es un modelo de doble ligadura del conducto biliar extrahepático LCBE en ratas Wistar macho adultas se ha estudiado el efecto de la administración de melatonina MEL y S-adenosyl-L-metionina SAMe sobre el estrés oxidativo y colestasis hepática provocada por este procedimiento quirúrgico. El grado de estrés oxidativo hepático se valoró mediante los cambios en la formación de lipoperóxidos LPO y el contenido de glutation reducido GSH en plasma, lisado de eritrocitos y homogenados de tejido renal y hepático. Asimismo, la colestasis y el daño hepático se investigó por los cambios acontecidos en las actividades enzimáticas en plasma de alanino aminotrasnferasa ALT, apartado aminotransferasa AST, fosfatasa alcalina FA, gamma-glutamiltranspeptidasa GGT, albúmina Ab, bilirrubina total BT y bilirrubina directa BD. Tanto MEL como SAMe se administraron diariamente desde los tres días previos al procedimiento quirúrgico hasta el décimo día después de la intervención. La LCBE determinó elevaciones altamente significativas de las actividades enzimáticas hepáticas, niveles de las dos fracciones de bilirrubina y formación de lipoperósicos en plasma, eritrocitos y tejidos renal y hepático, mientras que produjo un notable descenso en las reservas de GSH en estos medios biológicos. Tanto la administración de MEL como de SAMe demostraron su eficacia como antioxidantes y hepatoprotectores, aunque la expresión de estos efectos fue más notable para el caso de MEL, que evitó el descenso de GSH y descendió de forma muy significativa el incremento de las actividades enzimáticas y el grado de lipoperoxidación producido por la ligadura biliar. La SAMe no modificó los niveles de GGT y de BT. Sin embargo, la SAMe al igual que la MEL demostró gran eficacia en la recuperación del contenido de GSH en eritrocitos, plasma y tejidos hepático y renal.
  • MECANISMOS DE CONTROL DE LA SÍNTESIS DE LAS RESERVAS ENFRÉTICAS EN EL MÚSCULO ESQUELÉTICO Y SU INTERRELACIÓN .
    Autor: MONTELL BONAVENTURA EULALIA.
    Año: 2000.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.
    Resumen: Nuestro trabajo ha descrito mecanismos no establecidos del control de la síntesis de las reservas energéticas en el músculo esquelético, el glucógeno y los triglicéridos (TG). En primer lugar, nos planteamos averiguar la acción reguladora de los niveles de glucógeno, frente a la glucosa 6-P, en la resíntesis de glucógeno, así como el papel de la glucógeno fosforilasa (GF) en este proceso. Con este fin, sobrexpresamos esta enzima, mediante adenovirus recombinantes E1-deficientes, en cultivo primario de músculo humano y concluimos que los niveles de glucógeno, y no los de glucosa 6-P, controlaban la glucogénesis durante la recuperación del polisacárido. Por otro lado, experimentos de coexpresión de la GF y la "protein targeting to glycogen" o PTG, revelaron que la GF incrementaba la acción de la PTG sobre la glucógeno sintasa. Por lo tanto, se concluyó que la GF muscular no sólo determina la capacidad glucogenolítica, sino que también tiene un papel determinante en el control de la resíntesis de glucógeno. A continuación, analizamos la síntesis intramuscular de lípidos en el mismo modelo celular. Concretamente, se examinó el impacto metabólico de la sobrexpresión de la glicerol quinasa mediante adenovirus que contenían el gen de dicha enzima d'E, coli. Así, demostramos que el aporte de glucosa permitía alcanzar una síntesis de TG ya máxima, que no incrementaba por un aumento del "pool" de glicerol 3-P. Finalmente, analizamos la posible interferencia que podía causar una acumulación de lípidos en la captación muscular de glucosa. Los datos obtenidos revelaron que la incubación específica con ácidos grasos (AG) saturados incrementaba el transporte basal de glucosa y boqueaba el estimulado por insulina, mientras que los insaturados no ejercían dicha acción. Este efecto correlacionaba con una incorporación de los AG saturados como 1,2-diacilglicerol, a diferencia de los insaturados que eran acumulados como TG. Además, el tratamiento con una mezcla de palmítico y oleico redirigía la incorporación del palmítico desde los diglicéridos a los TG y anulaba el efecto sobre el transporte de glucosa. Finalmente, demostramos que los AG saturados promovían la translocación de la proteína quinasa C desde el citosol a la membrana celular, causando su activación.
  • DESARROLLO DE HERRAMIENTAS PARA EL MODELADO Y LA SIMULACIÓN DE RUTAS METABOLICAS .
    Autor: ATAURI CARULLA PEDRO RAMÓN DE.
    Año: 2000.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: DEPARTAMENTOS DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR DE LA UNIVERSIDAD DE BARCELONA.
    Resumen: Esta tesis doctoral está dedicada al desarrollo de herramientas matemáticas e informáticas para el análisis de vías metabólicas en estado estacionario, especialmente mediante coeficientes de sensibilidad, dentro de los entornos de análisis de la Teoría de Sistemas Bioquímicos (Biochemical Systems Theory, BST) y del Análisis del Control Metabólico (Metabolic Control Análisis, MCA). Los capítulos que la componen se estructura en tres partes. La primera parte se preocupa de aspectos derivados del tipo de representación matemáticas que es usado para describir vías metabólicas. En el primer capítulo se estudia un tipo de representación llamado S-systems, dentro de la BST, donde los procesos cinéticos aparecen agregados en procesos globales de síntesis y de degradación. En este primer capítulo se desarrollan herramientas específicas encaminadas a predecir cual va a ser el grado de violación de la estequiometría que se comete al solucionar estados estacionarios en un S-system. Por otro lado al representar matemáticamente una vía metabólica, esta aparece como un segmento del metabolismo que se analiza como una entidad aislada, de modo que intermediarios que serían variables dependientes si considerásemos todo el metabolismo, pasan a ser considerados parámetros de valor fijo, y determinan los límites del modelo. En los Capítulos II y III se analizan la dependencia de los coeficientes de sensibilidad a estos límites. En el capítulo II se estudia, por una parte, el efecto que la incertidumbre en los valores que se asigna a estos parámetros puede tener a la hora de caracterizar el comportamiento del modelo mediante sensibilidades y, por otra parte, se estudia la utilidad de las sensibilidades de segundo orden para evaluar estas situaciones. En el capítulo III se analiza, en los coeficientes de sensibilidad, el efecto que comporta el extender una vía metabólica lineal agregando una etapa extra de entrada o salida, donde los metabolitos de entrada o salida pasan de ser variables independientes a dependientes. La segunda parte la constituye el capítulo IV, donde se presenta un programa de ordenador, cuyas funciones están dirigidas a permitir introducir modelos matemáticos de vías metabólicas, calcular estados estacionarios, analizar su estabilidad, obtener dinámicas y caracterizar su comportamiento mediante análisis de sensibilidad. Todo ello para poder trabajar tanto desde la perspectiva de la MCA como desde la perspectiva de la variante GMA (generalized mass action) de la BST. Este paquete de funciones se ha diseñado para que quede abierto, tanto para permitir la incorporación de nuevas funciones en el futuro, como para poder acoplarse dentro de análisis más complejos. La tercera y última parte supone el desarrollo de otras herramientas matemáticas para analizar aspectos concretos de regulación y control en vías metabólicas. En el capítulo V se analiza el efecto de una inhibición por retroalimentación en el estado estacionario de una via lineal constituida por un secuencia de reacciones tipo Michaelis-Menten. Finalmente, en el capítulo VI se formulan los requerimientos generales que debe cumplir una enzima para que mantenga su capacidad de control al ser sobreexpresado.
  • EFECTOS PRODUCIDOS POR EL 17BETA-ESTRADIOL, EL TAMOXIFENO Y EL RALOXIFENO SOBRE LA ACTIVIDAD DE LOS OSTEOBLASTOS HUMANOS EN CULTIVO .
    Autor: MENDEZ DAVILA CIOLY CARMEN.
    Año: 2000.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FUNDACIION JIEMENEZ DIAZ.
    Resumen: Los mecanismos a través de los cuales los estrógenos ejercen sus efectos protectores sobre el hueso no se conocen completamente. En este trabajo se estudia elefecto del 17B-estradiol(ES) y dos moduladores selectivos de los receptores estrogénios (SERM), tamoxifeno (TA)y raloxifeno (RA) sobre la proliferación celular y la síntesis de colágeno y si estos agentes son capaces de regular la expresión y la sintesis de la interleucina 6(IL-6) tanto constitutiva como estimulada por IL-1B en osteoblastos humanos en cultivo. Los osteoblastos se obtuvieron de hueso tabecular de mujeres postmenopáuicas. Los osteoblastos en confluencia fueron mantenidos durante 24 h en medio sin rojo de fenol y sin suero fetal, con BSA al 0,1%. Se añadieron ES 10-8 M, TA 10-8M, RA 10-8 M o vehiculo (etanol) con o sin IL-1B. Despues de 24 horas, se determinaron los niveles de Il-6 y de propeptico aminoterminal de procolágeno I (PINP) en el medio de cultivo. La proliferacion celular fue medida a través de un ensayo metabolico y de contaje celular a las 48 y a las 96 horas de incubación. Para estudiar la expresión de Il-6, el medio de las celulas en confluencia fue reemplazado por DMEM libre de rojo de fenol y de suero, con BSA al 0,1%. Las células fueron tratadas con ES 10-8M,TA 10-8 M o RA 10-8 M durante 1,2,3, y 6 horas, o durante 3 horas con cada uno de estos agentes e IL-1B simultaneamente. Los niveles de mRNA fueron evaluados a través de transcripción reversa seguida de la reacción en cadena de la polimerasa. El ES, el TA y el RA produjeron un aumento de la proliferacion celular, pero ningun efecto sobre los niveles de PINP. La IL-1B estimulo la expresión y sintesis de la IL-6. El ES, TA y RA no modificaron la expresion ni la sintesis de IL-6, tanto la constitutiva, como la estimulada con IL-1B. Estos resultados demuestran un efecto estimulatorio del ES y los SERM, sobre la proliferacion de osteoblastos humanos en cultivo, pero ningun efecto, en estas condiciones, sobre la síntesis de colágneo. Los resultados sugieren que los efectos beneficiosos del ES, RA, o TA sobre la masa osea en mujeres postmenopáusicas, no estan mediados por un descenso en la expresión o secreción de la IL-6 por los osteoblastos. Otros mecanismos deben de estar implicados.
185 tesis en 10 páginas: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10
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