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ENZIMOLOGIA



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  • RECUBRIMIENTO DE SEMILLAS CON FOSFATASA ALCALINA DE ESCHERICHIA COLI INMOVILIZADA EN SOPORTES POLIFENÓLICOS PARA MEJORAR LA BIODISPONIBILIDAD VEGETAL DE FÓSFORO.
    Autor: PILAR IZQUIERDO MARÍA CONCEPCIÓN.
    Año: 2004.
    Universidad: BURGOS.
    Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.
    Resumen: El objetivo principal de este trabajo se centra en el recubrimiento de semillas de cebada con fosfatasa alcalina inmovilizada en soportes, naturales y sintéticos, con el fin de mejorar la nutrición de la planta mediante una solubilización localizada de fosfatos, especialmente en la rizosfera. Se procedió, en primer lugar, a la producción y extracción de fosfatasa alcalina a partir de una cepa hiperproductora de Escherichia coli (ATCC27257). En segundo lugar se estudió la inmovilización de la fosfatasa en dos tipos de soportes polifenólicos: (i) humatos edáficos y (ii) copolímeros fenólicos. De los resultados obtenidos hay que destacar los elevados niveles de retención de actividad fosfatasa en los inmovilizados, la mínima modificación en las características cinéticas de la enzima y la mejora de la estabilidad operacional de la enzima, lo cual lleva a la conclusión de que la inmovilización de fosfatasa alcalina es muy adecuada para posteriores aplicaciones biotecnológicas. Posteriormente se estudió el recubrimiento de semillas con fosfatasa alcalina, libre e inmovilizada, aplicando: (i) peliculado con metilcelulosa, (ii) peleteado con alcohol polivinílico y (iii) encapsulación en perlas huecas. De los resultados obtenidos se seleccionaron los recubrimientos con metilcelulosa y mediante encapsulación en perlas huecas como los más adecuados ya que, además de mantener niveles elevados de actividad enzimática en el recubrimiento conservaban la capacidad germinativa de las semillas tratadas. Por último, se estudió el efecto de la aplicación de fosfatasa inmovilizada sobre el desarrollo de las plantas, bien mediante la inoculación en suelo o mediante su incorporación en el recubrimiento de semillas. Los principales resultados obtenidos revelaban que la inoculación en suelo de fosfatasa inmovilizada en humatos incrementaba ligeramente la asimilación vegetal de fósforo, mientras que el recubrimiento de semillas con fosfatasa incrementaba la actividad fosfatasa en la rizosfera y el contenido de fósforo inorgánico edáfico, mejoraba la asimilación de fósforo por parte de las plantas y provocaba incrementos en la biomasa vegetal. En conclusión, y con vistas a la aplicación biotecnológica de este trabajo, se puede afirmar que el recubrimiento de semillas con fosfatasa inmovilizada no incorpora elementos perjudiciales o contaminantes al suelo, eleva los niveles de actividad fosfatasa en la rizosfera, favorece la asimilación de fósforo, mejora el desarrollo de la planta e incrementa la producción vegetal, con lo que el uso de este tipo de semillas recubiertas conduciría a una disminución del aporte de fertilizantes fosfatados, con lo que además de evitar el efecto contaminante, reduciría los costes globales del proceso incluyendo producción y descontaminación.
  • ABSORCIÓN IN VIVO DE OLIGÓMEROS DE EPICATEQUINA .
    Autor: García Ramírez Bernardino.
    Año: 2004.
    Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
    Centro de lectura: Facultad de Química.
    Centro de realización: Facultad de Química.
    Resumen: En los últimos años ha suscitado un gran interés la relación existente entre consumo moderado de vino y salud. Los efectos beneficiosos asociados al consumo moderado de vino se deben en gran medida a la presencia en este alimento de compuestos fenólicos. Sin embargo, no se conoce demasiado acerca del proceso de absorción, transporte sanguíneo, distribución tisular, metabolismo y excreción de los compuestos fenólicos en general (y de las procianidinas en particular) debido a una serie de problemas metodológicos existentes cuando se trabajan con este tipo de compuestos. Las procianidinas son unos compuestos oligoméricos presentes en el vino tinto en elevadas concentraciones que ejercen una serie de efectos fisiológicos beneficiosos para la salud. Por esta razón, esta tesis doctoral se centra en la síntesis de oligómeros de epicatequina y en el posterior estudio de la absorción in vivo en la rata de estos compuestos sintetizados. La síntesis de los oligómeros de epicatequina se lleva a cabo simulando una serie de reacciones de polimerización que tienen lugar durante el proceso de envejecimiento del vino tinto entre las procianidinas y el acetaldehído. La simulación a escala de laboratorio de este tipo de reacciones entre la epicatequina (monómero) y acetaldehído permitió la síntesis de estructuras oligoméricas con un grado de condensación comprendido entre 2 y 10. Además, estos compuestos oligoméricos permanecían estables al ser sometidos a un medio ácido similar al existente en el estómago. La administración de una sonda intragástrica de 50 mg de oligómeros de epicatequina a ratas macho Wistar permitió detectar en el plasma de estos animales de experimentación la presencia de una estructura dimérica formada por dos epicatequinas unidas mediante un puente de acetaldehído. Asimismo, también se detectó la presencia de este compuesto dimérico en el hígado de estos animales.
  • Caracterización cinética del mecanismo de reaccción y la especificidad de sustrato de peroxidasa.
    Autor: Gilabert Garcia María Ángeles.
    Año: 2004.
    Universidad: MURCIA.
    Centro de lectura: Facultad de Veterinaria.
    Centro de realización: Facultad de Veterinaria.
    Resumen: Se ha desarrollado un nuevo método de medida para la actividad enzimática de peroxidasa, se ha caracterizado su mecanismo de reacción y su (estereo)especificidad, identificando su etapa limitante. El estudio se ha aplicado a la isoenzima comercial con mayor aplicabilidad, la isoenzima C de peroxidasa de rábano (HRPC). El nuevo método cronométrico de medida permite superar la inestabilidad de los productos de la reacción enzimática de peroxidasa. Ello ha conducido a la caracterización cinética de Compuesto II, frente a un amplio conjunto de sustratos reductores. Se ha descrito un mecanismo cinético Ping-Pong con etapas de enlace y transformación, demostrando la formación de complejos enzima-sustrato en las tres fases del mecanismo de reacción. La especificidad de sustrato ha sido caracterizada determinando las constantes cinéticas correspondientes, sin y con saturación hiperbólica, estableciendo relaciones estructura-actividad (SAR) entre las mismas y descriptores electrónicos de los sustratos reductores. Se ha identificado mediante el estudio del efecto isotópico y su ajuste a la Ecuación de Marcus, que la etapa limitante del mecanismo de reacción es la trasnterencia electrónica del sustrato a la especie enzimática intermedia Compuesto II. Peroxidasa muestra estereoespecificidad, con mayor afinidad y rapidez de catálisis hacia los estereoisómeros L de los sustratos reductores, fenoles y anilinas.
  • ESTUDIO DEL ESTRES OXIDATIVO INDUCIDO POR EL 2,4D EN PLANTAS DE GUISANTE (PISUM SATIVUM L.) Y EN PEROXISOMAS DE HOJAS .
    Autor: MCCARTHY SUAREZ IVA.
    Año: 2003.
    Universidad: GRANADA.
    Centro de lectura: ESTACION EXPERIMENTAL DEL ZAIDIN.
    Centro de realización: ESTACION EXPERIMENTAL DEL ZAIDIN (C.S.I.C.) GRANADA.
    Resumen: El 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético) es un compuesto que se emplea como herbicida o como sustancia estimuladora del crecimiento en plantas dependiendo de su concentración. Aunque existe una gran cantidad de referencias sobre el efecto del 2,4-D en la fisiología de las plantas, todavía no se conoce bien el mecanismo íntimo de actuación de este herbicida a nivel celular y molecular. Investigaciones recientes apuntan a que las especies de oxígeno reactivo (ROS) podrían estar implicadas en el mecanismo de acción del 2,4-D, si bien aún se desconoce el origen de dichas especies. En esta Tesis Doctoral se utilizaron plantas de guisante (Pisum sativum L.) y se estudió el efecto del 2,4-D, a nivel foliar y radicular, sobre distintos parámetros fisiológicos y del metabolismo oxidativo de las plantas, con el objetivo de elaborar un modelo que contribuya a un mejor conocimiento del mecanismo de acción de los herbicidas auxínicos. Así, se ha comprobado que el 2,4-D podría generar una sobreproducción de ROS en la parte aérea de la planta. En las hojas, el exceso de radicales superóxido (O2.-) y de peróxido de hidrógeno (H2O2) parece inducir una situación de senescencia asociada a estrés oxidativo, lo que origina tasas más altas de oxidación y degradación de proteínas y peroxidación de membranas. Por el contrario, en los tallos de guisante, la producción de peróxido de hidrógeno podría actuar favoreciendo el crecimiento expansivo de las células de este órgano. Por otra parte, el 2,4-D es un compuesto xenobiótico que en aimales induce la proliferación de la población peroxisomal y una alteración importante en el metabolismo oxidativo de estos orgánulos celulares. Sin embargo, en plantas no se ha estudiado el efecto de este herbicida sobre los peroxisomas, aunque sí se dispone de datos que demuestran que otros xenobióticos afectan de forma considerable a los peroxisomas vegetales. El estudio del metabolismo oxidativo de los peroxisomas de hojas de guisante, realizado en esta Memoria Doctoral, indica que estos orgánulos celulares pueden desempeñar un papel importante en el mecanismo de acción del 2,4-D en las hojas. Los posibles daños ocasionados por una mayor tasa de producción de O2.- y de H2O2 en los peroxisomas podrían exportarse a otros compartimentos celulares contribuyendo, de esta manera, a los procesos degenerativos observados en las hojas tratadas con 2,4-D.
  • EFECTO DE LOS AMINOÁCIDOS COMUNES SOBRE LA INACTIVACIÓN DE LA NUCLEÓTIDO PIROFOSFATASA POR EL QUELANTE DE METALES EDTA: EVIDENCIA DE UN CAMBIO CONFORMACIONAL DEBIDO A LOS AMINOÁCIDOS LIBRES .
    Autor: ROMERO ARAUZ ANA M..
    Año: 2003.
    Universidad: EXTREMADURA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DE EXTREMADURA.
    Resumen: Las nucleótido-pirofosfatasas/fosfodiesterasas (NPP/PDE) son enzimas que hidrolizan derivados fosfoanhidrido y fosfodiéster de nucleósido 5'-monofosfatos (NMP), dando NMP como producto. Son ectoenzimas de membranas que pueden presentar también formas solubles. Su función biológica no se conoce con exactitud, aunque se les atribuyen diversos papeles fisiológicos y patogénicos relacionados con el recambio extracelular de derivados nucleotídicos, generación de pirofosfato extracelular, inhibición de la autofosforilación del receptor de insulina y aspectos de la motilidad e invasividad de células tumorales . No se conocen mecanismos fisiológicos de regulación de la actividad enzimática de las NPP/PDE. En esta tesis se ha investigado el efecto que producen los aminoácidos sobre la inactivación de la NPP/PDE de hígado de rata por bajas concentraciones del quelante de metales EDTA, que resultó ser un proceso dependiente del tiempo, bloqueado por el sustrato 4-nitrofenil-dTMP. La inactivación siguió una cinética de primer orden respecto a la concentración de NPP/PDE activa. Medidas de la actividad enzimática residual permitieron calcular la constante cinética aparente de inactivación (Ki(ap)). La sensibilidad al EDTA se ha empleado como una forma de sondear la conformación de la enzima. El efecto del EDTA fue potenciado por alfa-aminoácidos libres a concentraciones que, en ausenxia del quelante, no afectaban a la actividad enzimática. Todos los aninoácidos probados actuaron como aceleradores de inactivación por EDTA, aunque lo hicieron con distintas eficacias, estimadas en forma de factores de aceleración (cociente de los valores de ki(ap) obtenidos en presencia y en ausencia de aminoácidos) o de incrementos (porcentaje de aumentar del valor de ki(ap)). Experimentos hechos con compuestos cuya estructura difería de los alfa-aminoácidos en diversos aspectos indicaron que la presencia de los grupos alfa-amino y alfa-carboxilo, así como la distancia entre ellos, son elementos esenciales para el efecto observado. Los alfa-aminoácidos pueden actuar sobre la NPP/PDE en condiciones fisiológicas, pues lo hicieron (i) en forma de mezclas de aminoácidos preparadas en proporciones y a una concentración total similares a las que existen en la sangre en condiciones de ayuno, (ii) a pH fisiológico y (iii) sobre la NPP/DE integrada en preparaciones crudas de membranas hepáticas. Los resultados se interpretan como manifestación, de una interacción directa aminoácidos-enzima que produce un cambio de conformación de la proteína. Estudios de correlación, entre la estructura de los compuestos probados y su actividad, indican que dicha interacción se establece mediante múltiples elementos estructurales, entre los cuales debe incluirse la unión del aminoácidos a iones metálicos (posiblemente Zn2+) ligados a la enzima. El cambio de conformación producido por la unión a alfa-aminoácidos podría tener significado en relación con acciones de las NPP/PDE que no dependan de su actividad catalítica sino de interacciones proteína-proteína, como es el caso conocido de la interacción de una NPP/PDE con el receptor de insulina.
  • IDENTIFICACIÓN, LOCALIZACIÓN Y REGULACIÓN DEL IDURONATO-2-SULFATASA EN LOS ISLOTES PANCREÁTICOS .
    Autor: CORONADO PONS INMACULADA.
    Año: 2003.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: MEDICINA .
    Centro de realización: FACULTAD DE BARCELONA.
    Resumen: La enzima lisosomal, iduronato-2-sulfatasa (IDS) (EC. 3.1.6.13) esta relacionada con el catabolismo de los proteoglicanos, concretament del dermatan sulfato y heparan sulfato. El proteoglicano, heparan sulfato perlecano, se ha identificado en los islostes pancreáticos formando parte de los depósitos de amiloide que se forman en la mayoría de pacientes con diabetes tipo 2. Se ha demostrado que el perlecano interacciona con la amilina y actúa potenciando la formación de las fibrillas de amilina. La hipótesis de la tesis, propone que un déficit en la expresión del IDS podría dar como consecuencia una alteración delmetabolismo de los proteoglicanos, concretamente del perlecano, que afectaría a la función secretora de las células beta pancreática. El objetivo general es el de estudiar la enzima IDS enlos islotes pancreáticos humanos y de ratón, su localización, su regulación y su efecto sobre la respuesta secretora de insulina y a la estructura morfológica del islote. La localización del IDS en el tejido pancreático humano y de ratón, demostró que este enzima se expresa específicamente en los islotes pancreáticos en relación al tejido exocrino. La expresión del IDS se detecta en las células beta y en las células alfa del islotes pancreático. También se ha demostrado que el IDS se localiza en los lisosomas de las células beta pancreáticas. La expresión del mRNA del IDS en los islotes de ratón esta regulada mediante la vía glicolítica, en cambio, en los islotes humanos y de ratón, tampoco esta regulada por la glucosa. La disminución de la expresión del IDS provoca una disminución significativa del contenido de insulina en los islotes de ratón y provoca que la morfología de los islotes humanos esté totalmente afectada, con un incremento del número y del tamaño de los lisosomas, así como un aumento de la crinofagia. Como conclusión final de la tesis: el iduronato-2-sulfatasa se localiza en los lisosomas de los islotes pancreáticos, su patrón de expresión en los islotes de ratón no coinciden con el de los islotes humanos y la reducción de la expresión del IDS en los islotes pancreáticos, produce una alteración de la función secretora de insulina, a través del aumento de la crinofagia.
  • ENZIMAS DE METABOLISMO CENTRAL COMO BIOMARCADORES EN CHAMELEA GALLINA .
    Autor: AMEZCUA RODRÍGUEZ OSCAR.
    Año: 2003.
    Universidad: CADIZ.
    Centro de lectura: CIENCIAS DEL MAR.
    Centro de realización: CICEM "EL TORUÑO".
    Resumen: Antes de enfermar o morir, los seres vivos responden al estrés alterado distintos parámetros-biomarcadores- a nivel molecular, celular, histológico, fisiológico, de organismo, población o ecosistema que señala la presencia de contaminantes o sus efectos a dichos niveles. Los biomarcadores moleculares o celulares responden pronto al estrés y sirven como alertas tempranas de contaminación, antes que el ecosistema se dañe irreversiblemente. En el seguimiento de las Zonas de Producción de Moluscos Bivalvos del litoral andaluz, se usan como bioindicadores varias especies de bivalvos de interés comercial presente en la zona, chirla (Chamelea gallina), berberecho (Cerastoderma edule), coquina de arena (Donax spp.) y coquina de fango (Scrobicularia plana). Aunque datos de contenidos metálicos en estas especies desde 1996, no se conocen sus respuestas a contaminantes modelo, sus cinéticas de acumulación y eliminación, ni el comportamiento de sus biomarcadores moelculares frente a los contaminantes, dificultando las decisiones sobre su comercialización. En el marco de un proyecto más amplio, nos proponemos evaluar con criterio científico los moluscos bivalvos citados como bioindicadores para optimizar su uso rutinario en el litoral andaluz. Para ello trabajamos con una de las especies mencionadas exponiendola en condiciones controladas a contaminantes modelo y se siguieron las cinéticas de acumulación y eliminación de contaminantes y su estado fisiológico, analizando en paralelo parámetros biológicos de bienestar fisiológico o bimarcadores químicos que señalen el grado de funcionamiento de sus principales rutas metabólicas. Para ello nos proponemos los siguientes objetivos: Establecer el comportamiento dentro de un microcosmos de un lote de chirlas ante la exposición crónica a un tóxico modelo (Aroclor 1254) y su capacidad de acumlular/desacumular los distintos PCB's. Estudiar la evolución a lo largo de un año de varias poblaciones naturales para ver los cambios estacionales de enzimas indicadoras del funcionamiento de rutas metabólicas básicas y diversos índices de condición. Estudiar el comportamiento de diversos biomarcadores enzimáticos en experiencia de exposición aguda a distintos contaminantes modelo en diferentes dosis: Aroclor 1254, Cobre, Arsénico y Tributilestaño. Comprobar la concordancia ante diversos factores de estrés, como la exposición a contaminantes, de la respuesta de biomarcadores convencionales de contaminación y estrés oxidativo.
  • DISEÑO Y SÍNTESIS DE INHBIDORES DEL ENZIMA LACTATO DESHIDROGENASA DE PLASMODIUM FALCIPARUM .
    Autor: GABARRO CARRION RAQUEL.
    Año: 2003.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: QUÍMICA.
    Centro de realización: FACULTAD CC. QUÍMICAS - UNIVERSIDAD COMPLUTENSE.
    Resumen: La Malaria es actualmente una de las causas de mayor morbilidad y mortalidad en el mundo. Se estima que existen entre 400-500 millones de casos clínicos por año y que entre 1,5 - 2,7 millones de personas mueren a causa de dicha enfermedad. Aunque la enfermedad ha sido erradicada en la mayor parte de las zonas templadas y desarrolladas de la Tierra, todavía continúa siendo endémica en la mayoria de las zonas tropicales y subtropicales. El cuarenta por ciento de la población mundial vive en zonas endémicas. La Malaria es causada por protozoos pertenecientes al género Plasmodium, de entre todas las especies de Plamodium, cuatro infectan al hombre: Plamodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale y Plasmodium malare, siendo la especie falciparum, la sometida a estudio en este trabajo. Los tratamientos actuales de la enfermedad incluyen fármacos como la cloroquina, quinina, quinidina, halofantrina, sulfonamidas, etc. Lejos de ser totalmente eficaces, actualmente se hace necesario el uso de combinaciones de los anteriores para combatir la enfermedad, teniendo como consecuencia la alta frecuencia de aparición de resistencias a dichos medicamentos. Existe una necesidad urgente de nuevos compuestos con actividad antimalárica, con nuevos mecanismos de acción y que permitan un tratamiento eficaz y más seguro de la enfermedad. Dentro de los nuevos mecanismos de acción propuestos, el enzima Lactato Deshidrogenasa (LDH) de Plasmodium falciparum es una de las dianas antimaláricas más aceptadas por su grado de validación y su conocimiento estructural. Dicho enzima está involucrado en la forma de obtención de energía por parte del parásito, por lo que la inhibición catalítica de eésta, presumiblemente, llevaría a la muerte del parásito. A tal objeto, se ha llevado a cabo el diseño, síntesis y evaluación biológica de compuestos que presentan inhibición de dicho enzima. A través de cálculos teóricos, usando como herramienta informática el programa GOLD, se ha dirigido el desarrollo de un programa de síntesis, obteniéndose gran diversidad de compuestos de la familia de zoles y acetoácidos, de los cuales se ha medido su capacidad de inhibidir a la LDH. Los resultados obtenidos validan al enzima como diana antimalárica y abren un gran potencial para mejorar las interacciones de los ligandos con el sitio activo con dicho enzima.
  • ESTUDIOS ESTRUCTURA/FUNCION SOBRE LA ENZIMA ARIL ALCOHOL OXIDASA IMPLICADA EN LA BIODEGRADACION DE LA LIGNINA.
    Autor: FERREIRA NEILA PATRICIA.
    Año: 2003.
    Universidad: ALCALA.
    Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
    Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLOGICAS (CSIC). MADRID.
    Resumen: La biodegradación de la lignina es un proceso oxidativo, llevado a cabo por los denominados hongos de podredumbre blanca. El peróxido de hidrogeno tiene un importante papel en este proceso como precursor del radical libre hidroxilo y co-sustrato de peroxidasas ligninolíticas. La aril-alcohol oxidasa (AAO) de Pleurotus eryngii es una flavoproteína extracelular que genera H2O2 en la reacción de oxidación de la enzima por el O2, mientras que su reducción da lugar a reacciones de oxidación y deshidrogenación de diferentes alcoholes aromáticos. Su reciente clonación y expresión heteróloga en Emericella nidulans y Escherichia coli ha permitido completar la caracterización fisicoquímica, cinética y estructural de la AAO. Los estudios de especificidad de sustrato pusieron de manifiesto que los sustratos típicos de la AAO son alcoholes aromáticos o alifáticos poliinsaturados con un hidroxilo primario en el Ca. Además los estudios de inhibición revelaron que la AAO tiene afinidad por compuestos con sistemas de dobles enlaces conjugados con o sin grupos hidroxilo alcohólicos. Los estudios de cinética rápida con diferentes alcoholes pusieron de manifiesto la dependencia de las cinéticas de reducción de la AAO del tipo sustrato. La AAO presenta una moderada homología de secuencia con la glucosa oxidasa de Aspergillus niger lo que permitió su modelado por homología (entrada PDB 1QJN). La comparación de la estructura primaria de la AAO con la glucosa oxidasa y otros miembros de la familia GMC de oxido-reductasas, reveló la existencia en la secuencia de la AAO de los cuatro motivos conservados en esta familia. Este hecho, junto con las similares características estructurales encontradas, han llevado en este trabajo a incluir a la AAO de P. eryngii como un nuevo miembro de la familia GMC. La arquitectura molecular general de la AAO presenta dos dominios estructurales: i) dominio de unión del FAD y ii) dominio de unión al sustrato. En los estudios de acoplamiento molecular de la AAO con distintos sustratos se observó que éstos se localizaban en las inmediaciones del cofactor, describiéndose un bolsillo de unión de los sustratos. Posteriores estudios de mutagenesis dirigida confirmaron el papel de alguno de los residuos del centro activo de la AAO en la actividad catalítica de la enzima, demostrándose la necesidad de un residuo aromático en las posiciones ocupadas por Y92 y F501, así como el papel indispensable para la actividad de las His502 y His546. Se propone que estas dos His, actuarían como bases en la reacción de oxidación de los sustratos mediante un mecanismo de deshidrogenación por transferencia directa de un hidruro y reducción del FAD.
  • OBTENCIÓN DE ÉSTERES DEL ÁCIDO LÁCTICO POR VÍA ENZIMÁTICA .
    Autor: SANZ RODRÍGUEZ M. ANGELES.
    Año: 2003.
    Universidad: OVIEDO.
    Centro de lectura: QUIMICA.
    Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA (UNIVERSIDAD DE OVIEDO).
    Resumen: El lactosuero es la fracción líquida separada de la cuajada durante la fabricación del queso. Contiene más de la mitad de los sólidos originales de la leche, representando la lactosa el 70-80% de los mismos. Este disacárido es responsable de la elevada demanda química de oxigeno (DQO) de esta corrriente, por lo que ésta no puede eliminarse directamente como vertido de la industria láctea. Una de las técnicas más utilizadas en los últimos tiempos para el aprovechamiento de este lactosuero ha sido la recuperación de las proteínas presentes en el mismo y fraccionamiento de las mismas mediante ultrafiltración. El permeado de esta operación contiene la mayor parte de la lactosa y sales originalmente presentes en el suero, por lo que tampoco es posible su vertido sin tratamiento previo. Una vía interesante para la revalorización de dicho permeado es la hidrólisis de la lactosa, obteniéndose jarabes de glucosa y galactosa, productos que poseen unas mayores propiedades funcionales y que pueden utilizarse como materia prima para la obtención de productos de elevado valor añadido como son los ésteres lácticos. En el presente trabajo se han llevado a los procesos de hidrólisis de la lactosa y esterificación de ácido láctico por vía enzimática. En el caso de la hidrólisis de la lactosa se ha utilizado la enzima b-galactosidasa de Aspergillus oryzae. La viabilidad de este proceso a escala industrial obliga a la realización del mismo en continuo, para lo cual la enzima se ha inmovilizado en reactores enzimáticos de membranas. Se han empleado módulos de fibras huecas de polisulfona con tamaños de corte nominal de 10000 y 3000 Da. La inmovilización se ha llevado a cabo tanto en la cara externa (soporte) como en la cara interna (piel) de las fibras. También se ha comparado en ambas membranas la diferencia existente entre el proceso de inmovilización por retención y por adsorción. Posteriormente a la inmovilización, se han llevado a cabo experimentos de hidrólisis, siguiendo el mismo patrón de flujo que el empleado en cada inmovilización. El principal problema que se presenta a la hora de realizar esterificaciones de ácidos hidroxicarboxílicos es que éstos pueden sufrir una autoesterificación. Para aumentar la selectividad de esterificación del ácido láctico con el alcohol deseado se puede o bien proteger el grupo hidroxilo del ácido o utilizar una enzima específica que no cataliza la reacción con el ácido como nucleófilo. Con este objeto, en el presente trabajo se ha utilizado la lipasa de Candida antarctica B para llevar a cabo la esterificación del ácido láctico con varios alcoholes de cadena corta. Una de las variables fundamentales en este tipo de reacciones es el grado de hidratación del medio; a medida que aumenta éste, la reacción se desplaza hacia la hidrólisis del éster formado. En el presente trabajo se han utilizado tamices moleculares y gel de sílice para controlar el contenido de agua presente en el medio de reacción. Con todos los alcoholes utilizados (con cadenas de uno a cuatro átomos de carbono) se han obtenido elevadas conversiones siempre se ha utilizado el propio alcohol como disolvente de la reacción. Otra de las técnicas susceptibles de ser utilizadas para eliminar el agua de reacción de manera continua es la pervaporación. Para ello se han realizado experimentos a escala de laboratorio empleando membranas hidrofílicas. Los resultados preliminares obtenidos muestran la potencialidad de la pervaporación en la mejora de la conversión en reacciones de esterificación de ácido láctico.
  • LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE C-ABL INDUCE LA FOSFORILACIÓN DE P73 .
    Autor: SANCHEZ-AREVALO LOBO VICTOR JAVIER.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: HOSPITAL PUERTA DE HIERRO.
    Resumen: El gen p73 es un nuevo miembro de la familia de p53, que pertenece a un grupo de genes implicados en diferenciación y respuesta a estrés. El mecanismo molecular responsable de la regulación de la actividad de p73 sigue siendo actualmente poco entendido. Recientemente, p73 fue descrito como sustrato de la actividad enzimática de c-Abl, una de las pocas Tirosina quinasas no receptores, la cual es activada potentemente en respuesta a daño al ADN. En esta tesis demostramos como c-Abl, mediante la activación de p38 MAPK, induce la fosforilación de p73 en residuos Treonina adyacentes a Prolina. La sola activación de p38 MAPK es suficiente para inducir la estabilización de p73 y su actividad transcripcional. Nuestros datos indican que la familia de la SAPK y más concretamente p38 MAPK esta implicada en la regulación de p73. A continuación, decidimos profundizar en el papel de c-Abl en un contexto patológico como es el generado por la proteína quimérica Bcr/Abl, de actividad Tirosina quinasa constitutiva. Bcr/Abl ha sido relacionada con múltiples rutas de transducción de señales como AKT, JNK y ERK1/2, no habiéndose establecido ninguna conexión con la ruta de p38 MAPK. Mediante transfecciones transitorias demostramos como la sobre expresión de Bcr/Abl en 293T es capaz de activar a p38 MAPK e inducir la estabilización de p73, lo que sugiere que c-Abl y Bcr/Abl comparten efectores biológicos. El control ejercido por Bcr/Abl sobre p38 MAPK es mediado de forma tanto dependiente como independiente de c-Abl. Lo que se demuestra por la activación de sus reguladores naturales, MKK6 y MKK3, el uso del inhibidor químico de c-Abl, STI571 o la sobre expresión de Bcr. En un modelo experimental basado en una línea derivada de una Leucemia Mieloide Crónica, como K562 o células transfectadas con Bcr/Abl presentan mayores niveles de P-p38 MAPK, respecto a células negativas para Bcr/Abl. Por otro lado, las células sin expresión de Bcr/Abl son capaces de activar a p38 MAPK tras un estímulo c-Abl dependiente, como es el tratamiento con Ara-C. Esto no ocurre en células que expresan Bcr/Abl, lo que sugería una insensibilidad de la ruta de p38 MAPK a Ara-C. Por lo tanto Bcr/Abl es capaz de interferir con la ruta p38 MAPK generando un fenotipo resistente al Ara-C. Esto permitirá el desarrollo de nuevos abordajes terapéuticos basados en la combinación de Ara-C con inhibidores de c-Abl, esta combinación ha demostrado ser protectora en células normales y potenciadora de la toxicidad en células Bcr/Abl.
  • ADN POLIMERASA MU (POL MU), UNA ENZIMA IMPLICADA EN REPARACIÓN Y VARIABILIDAD DEL ADN .
    Autor: RUIZ PÉREZ JOSÉ FRANCISCO.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: CENTRO DE BIOLOGÍA MOLECULAR SEVERO OCHOA.
    Resumen: El objetivo inicial de esta tesis doctoral fue la identificación de ADN polimerasas homólogas a la ADN polimerasa beta que participaran en procesos de reparación de ADN. Así, pudimos identificar una nueva ADN polimerasa humana perteneciente a la familia X a la que se denominó ADN polimerasa mu (Pol mu). Como el primer paso para poder demostrar que la Pol mu era efectivamente una ADN polimerasa, se llevó a cabo el clonaje de ADNc correspondiente al gen POLM humano para introducirlo en vectores de expresión de genes heterólogos en E.coli y sobreproducir proteína recombinante en grandes cantidades. Esta sobre-expresión, junto con un posterior proceso de purificación selectiva nos permitió obtener elevadas cantidades de Pol mu humana recombinante altamente purificada. Con esta proteína se pudo demostrar in vitro que la Pol mu es una ADN polimerasa. Tras la demostración de que la Pol mu humana recombinante posee actividad ADN polimerasa, se llevó a cabo una caracterización bioquímica detallada de esta enzima, determinando sus parámetros de eficiencia catalítica en las reacciones de síntesis, la afinidad por diferentes tipos de sustratos de ADN, la procesividad y la fidelidad de síntesis. En vista de los análisis preliminares, que indicabn que la Pol mu poseía una baja fidelidad de síntesis, llevamos a cabo un análisis exhaustivo de la capacidad de incorporación de errores por Pol mu (fenotipo mutador) en diferentes condiciones experimentales. De esta manera pudimos obtener información valiosa acerca de cúal es el mecanismo de acción de la Pol mu y cómo genera los errores de síntesis. Por otro lado, se llevó a cabo un análisis estructura-función de la Pol mu humana, con la finalidad de determinar posibles dominios funcionales y sitio/s activo/s de la enzima a lo largo de la estructura primaria de la proteína. Así se definieron una serie de resíduos aminocídicos supuestamente esenciales en lainteracción de Pol mu con los diferentes sustratos de polimerización (ADN, nucleótidos, etc..). Algunos de estos residuos fueron sustituídos por aminoácidos conservativos desde el punto de vista estructural, aunque tratando de eliminar su función. Tanto en la identificación de los residuos como en elección de los sustitutos fue esencial el modelado de la Pol mu sobre las diferentes estructuras cristalinas existentes de la Pol beta, el miembro de la familia X mejor estudiado hasta el momento. Para poder delimitar cual es la función o funciones de la Pol mu se llevó a cabo un estudio de la expresión de esta ADN polimerasa en diferentes tejidos humanos, tanto a nivel de ARNm como a nivel de proteína. Para llevar a cabo los análisis de expresión de Pol mu se generaron anticuerpos específicos frente a ella mediante inmunización de conejos con la proteína recombinante purificada. En base a los datos bioquímicos y de expresión obtenidos intentamos determinar el posible papel de la Pol mu humana en el proceso de hipermutación somática (SHM) de las células beta, mediante el cual se introducen mutaciones en las regiones variables de los genes que codifican inmunoglobulinas. Asímismo, intentamos correlacionar los resultados obtenidos con un posible papel de Pol mu en los mecanismos celulares de reapración de ADN, concretamente en la reparación de rotuas de doble cadena en el ADN mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ).
  • PURIFICACIÓN, CARACTERIZACIÓN Y MECANISMOS ADAPTATIVOS DE LA GLUTAMINA SINTETASA EN LA OXIFOTOBACTERIA MARINA PROCHLOROCOCCUS .
    Autor: EL ALAOUI SABAH.
    Año: 2002.
    Universidad: CORDOBA.
    Centro de lectura: VETERINARIA.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD CÓRDOBA.
    Resumen: Se ha estudiado la regulación de la glutamina sintestasa (GS) de tres estirpes de Prochlorococcus (SS120, MED4, PCC9511), analizando los niveles de actividad transferasa (determinación espectrofotométrica del gamma-glutamil hidroxamato formado) y biosintética (determinación mediante HPLC de glutamina producida), así como la concentración intracelular de la proteína GS (determinada mediante inmunoelectroforesis cuantitativa). La actividad glutamina sintetasa disminuía cuando los cultivos se sometían a ausencia de nitrógeno o en presencia de fuentes de nitrógeno no asimilables. La ausencia de fósforo tenía un efecto aún más marcado sobre la actividad dela enzima. El MSX provocaba una inactivación de la enzima menor que en otros organismos fotosintéticos; por otro lado, la adición de azaserina provocaba un incremento de la actividad. La oscuridad no afecvta de forma significativa la actividad de la enzima, en tanto que la respuesta antagónica de los inhibidores DCMU y DBMIB en alguna estirpe parece indicar que las plastoquinonas podrían estar implicadas en la regulación de esta enzima. Por otro lado, la cuantificación de la concentración de proteína GS en extractos celulares de cultivos sometidos a diferentes condiciones mostró que la azaserina inducía un incremento en la concentración de la enzima; sin embargo, otras condiciones (ayuno de nitrógeno, adición de inhibidores como MSX, DCMU o DBMIB) no parecen afectar significativamente la concentración de la GS. Hemos purificado la glutamina sintetasa de dos estirpes de Prochlorococcus (PCC9511 y SS120). Se obtuvó una preparación eletroforéticamente homogéna. Se calcularon los valores de Km para los ensayos de actividad transferasa y biosintética, observándose valores similares entre ambas estirpes. El peso molecular estimado fue de 48,6 kDa. La temperatura óptima para la actividad transferasa es de 55ºC, el pH óptimo de 7,5. Los resultados obtenidos no diferen significativamente de los descritos para otras cianobacterias.
  • ESTUDIO DE LA BIOTRANSFORMACIÓN DE COMPUESTOS TRIMETILAMONIO CON CEPAS DE E.COLI PARA LA PRODUCCIÓN DE L(-)-CARNITINA .
    Autor: TORROGLOSA GARCÍA TOMÁS.
    Año: 2002.
    Universidad: MURCIA.
    Centro de lectura: QUÍMICA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y QUÍMICAS.
    Resumen: La L(-)-carnitina interviene en el transporte de ácidos grasos de cadena larga a través de la membrana interna mitocondral. En la actualidad, el 80% de la carnitina utilizada a nivel mundial se obtiene por vía química, lo que da lugar a la producción de la mezcla racémica (D,L)-carnitina y crotonobetaína. De ahí, que los depósitos existentes de estos subproductos sean elevados. Este hecho, junto a que el proceso de resolución del racemato supone un problema medioambiental, hace que se incremente el interés por los métodos biológicos de producción de L(-)-carnitina. Así, los estudios realizados en la presente Tesis Doctoral han consistido, en primer lugar, en la optimización de la biotransformación de D(+)-carnitina en L(-)-carnitina, mediante la utilización de E.coli 044 K74 en estado durmiente, con tal de la establecer los parámetros que afectan a la biotransformación Con el fin de aumentar la producción de carnitina se han analizado, en segundo y tercer lugar, los efectos producidos por un incremento de estrés salino y de la permeabilización celular en el proceso de biotransformación de compuestos de trimetilamonio en L(-)-carnitina, tanto con células en estado durmiente de E.coli 044 K74 como con la cepa transformada K38 pT7-5 KE32. Así, se obtuvieron rendimientos de entre el 65 y el 88% respecto al 40% del control, mediante ambas modificaciones de las dos cepas. También, se analizaron las cinéticas del transporte de L(-)-carnitina en ambas cepas obteniendo como resultado que depende de ATP y que la cepa transformada presentó una menor Km y Vmax aparente respecto a la cepa silvestre. La memoria también presenta el trabajo realizado sobre el metabolismo primario de Escherichia coli 044 K74 y su interrelación con el metabolismo de los compuestos de trimetilamonio. Para ello se analizaron las actividades de las enzimas implicadas en las rutas metabólicas primarias del metabolismo de L(-)-carnitina y del estado energético celular. Se llega a la conclusión de que los niveles de ATP y la relación acetil-CoA/HS-CoA son críticos para la biotransformaciones, ocupando el ciclo del glioxilato un papel fundamental. Por último, se ha analizado mediante el empleo de la citometría de flujo, l,a evolución de los niveles de proteína, ARN y ADN por unidad de célula en los medios de biotransformación, así como la determinación de la viabilidad celular. Así, se observó que gran parte del proceso de biotransformación es llevado a cabo por células muy dañadas o muertas.
  • ESTUDIOS DE LAS ACTIVIDADES FERULIL ESTERASA PRODUCIDAS POR DOS CEPAS DE STREPTOMYCES.
    Autor: DIEZ GARCIA NARDY DEL VALLE.
    Año: 2002.
    Universidad: ALCALA.
    Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
    Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.
    Resumen: En el Departamento de Microbiología y Parasitología de la Universidad de Alcalá se están realizando estudios con la finalidad de evaluar la capacidad de los actinomicetos, y en particular de diferentes cepas del genero Streptomyces, para degradar enzimáticamente la lignocelulosa. Cabe señalar que es muy escasa la información disponible referente a enzimas accesorias capaces de liberar ácidos cinámicos unidos a las cadenas de polisacáridos, y en particular, acerca de la actividad FAE y sus correspondientes genes. En este trabajo se describe la producción, purificación y caracterización físico-química de dos actividades FAE producidas por diferentes cepas de Streptomyces: S. avermitilis CECT 3339 y S. thermocarboxydus UAH44. Además, se han valorado dichas actividades frente a diferentes sustratos poliméricos y se ha intentado secuenciar el extremo N-terminal de las proteínas, así como de péptidos internos de las mismas, con objeto de iniciar estudios de genética reversa dirigidos a la identificación de los genes que las codifican.
  • EVALUACIÓN IN VIVO DE LACTASA INTESTINAL CON 4-GALACTOSIL-XILOSA COMO PRUEBA DIAGNÓSTICA NO INVASIVA DE LA DEFICIENCIA DE ESTE ENZIMA. ENSAYO PILOTO EN HUMANOS .
    Autor: HERMIDA DÍAZ CARMEN.
    Año: 2002.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MADRID.
    Resumen: Se ha optimizado la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal con 4-, 3- y 2- galactosil-xilosas mediante la determinación colorimétrica de xilosa en orina tras la administración oral del disacárido sintético a ratas lactantes. De los compuestos examinados, 4-galactosil-xilosa fue el más eficaz para esta metodología, puesto que dio lugar a la máxima correlación (r=0,96) entre la variación de la eliminación de xilosa y la caída fisiológica de la actividad lactasa con el destete de las ratas, siendo empleado a una dosis de 4 mg. El análisis de las características cinéticas del enzima de rata con las tres galactosil-xilosas empleadas ha permitido dar cuenta de su diferente comportamiento in vivo, encontrándose también que la 4-galactosil-xilosa es hidrolizada in vivo e in vitro en mayor proporción a nivel del centro activo para florizina que del centro para lactosa. La determinación de xilosa en plasma, tras la administración oral de 8 mg del disacárido a ratas lactantes, permite evaluar el enzima in vivo con similar fiabilidad que en orina. Un ensayo piloto realizado en sujetos adultos tolerantes e intolerantes a la ingesta láctea ha evidenciado que esta metodología es válida para la evaluación no invasiva en humanos de la actividad lactasa in vivo, siendo suficiente la ingestión de 250 mg de 4-galactosil-xilosa para poder detectar una reducción marcada de la excreción urinaria de xilosa en sujetos intolerantes. La actividad del enzima pudo también seguirse determinando la aparición de xilosa en plasma tras la ingesta de 3 g del disacárido, objetivándose su disminución en un sujeto hipolactásico. Ninguno de los sujetos estudiados presentó molestias tras el consumo de 4-galactosil-xilosa.
  • CINÉTICA DEL COMPOSTAJE EN CONDICIONES DE TRÓPICO HÚMEDO MEDIANTE VARIABLES DE PROCESO Y PUNTO FINAL .
    Autor: PELÁEZ JARAMILLO CARLOS ALBERTO.
    Año: 2002.
    Universidad: RAMON LLULL.
    Centro de lectura: IQS .
    Centro de realización: ESCOLA TÉCNICA SUPERIOR IQS.
    Resumen: El compostaje como proceso industrial para el tratamiento de los residuos sólidos orgánicos ha tomado en los últimos años gran relevancia, fundamentalmente por el hecho de permitir un doble propósito. En primera instancia permite la estabilización (química y biológica) de residuos sólidos orgánicos, por lo que reduce considerablemente el impacto ambienta generado por una disposición inadecuada de la materia orgánica y, paralelamente puede ser concebido desde una perspectiva agronómica dado que suministra productos al suelo agrícola restituyendo su estructura y estabilidad. Los trabajos de investigación que se han desarrollado para entender el proceso, pueden estar referidos a la biorremediación, cuando la voluntad del proceso se centra en aspectos ambientales. A aspectos agronómicos, cuando el objeto esta dirigido a la formulación de insumos agropecuario o en el mejor de los casos, la definición trata de englobar ambos aspectos. En el presente estudio se considera que esta biotransformación cumple la doble función al procesar residuos sólidos orgánicos y generar a partir de ellos un producto con una fracción orgánica estable desde las perspectivas químicas, ambiental y agronómica. En el presente trabajo se analiza cuantitativamente el comportamiento de variables generales de tipo físico, químico y biológico y otras más específicas que se ocupan de aspectos bioquímicos y agronómicos. Se desarrollan métodos en fase sólida para las determinaciones enzimáticas en compost y en función de la materia prima se describe el efecto de inducción por substrato para diferentes actividades enzimáticas. Los procesos estudiados se centran en las condiciones bioclimáticas del trópico húmedo, a partir de materias primas propias de la zona y fundamentalmente con el fin de generar alternativas para una producción que minimice los riesgos de impacto ambiental.
  • PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA DE POLIGALACTURONASAS INDUCIDAS EN ASPERGILLUS NIGER CON PECTINA DE CÍTRICO .
    Autor: BRIZUELA FERNÁNDEZ M. PALOMA.
    Año: 2002.
    Universidad: BURGOS.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.
    Resumen: El objetivo principal de este trabajo de investigación se centra en el diseño de un protocolo de purificación de las poligalacturonasas de Aspergillus niger CECT 2088, mediante el cual se obtengan niveles adecuados de rendimiento y un alto grado de purificación. Aspergillus niger sintetiza múltiples formas de poligalacturonasa, cuya expresión puede regularse por factores tales como el tipo de cepa utilizada, las condiciones de crecimiento microbiano y el inductor utilizado. Por este motivo, inicialmente se estudió la influencia del medio de proliferación del hongo en la producción de isoenzimas, estableciéndose como condiciones óptimas para la producción de actividad poligalacturonasa, el crecimiento del microorganismo en el medio Czapek-Dox y la posterior inducción con pectina de cítrico. Teniendo en cuenta que el extracto crudo donde se encuentran las enzimas a purificar es un medio fúngico extracelular, se planteó un proceso de purificación en el que se comenzó aplicando técnicas poco resolutivas que permitiesen concentrar la proteína en un mínimo volumen de trabajo, como la ultrafiltración y la precipitación fraccional con sulfato amónico. Posteriormente, se aplicaron técnicas de mayor resolución como la cromatografía de permeabilidad en gel y la cromatografía de intercambio iónico. El proceso incluía por tanto cuatro etapas de bajo coste económico y aplicables a gran escala. Como resultado del proceso global de purificación se obtuvieron cuatro fracciones con actividad poligalacturonasa, una de ellas, completamente purificada. Su posterior caracterización permitió obtener un mayor conocimiento de las isoenzimas y rentabilizar sus aplicaciones industriales. Así, los pesos moleculares de las cuatro poligalacturonasa aisladas fueron 73.811, 40.620, 59.030 y 59.470 Da. Además, todas ellas presentaban puntos isoeléctricos ácidos iguales o inferiores a 4,00 y mostraban diferente afinidad por el ácido poligalacturónico. Las poligalacturonasas purificadas son demandadas en la actualidad para su aplicación en procesos de la industria alimentaria tales como la maceración de tejidos vegetales o la producción o oligogalacturónidos (ingredientes de los alimentos funcionales).
  • SOBRE-EXPRESION DE ENZIMAS HIDANTOINASA Y CARBAMILASA .
    Autor: PERIRA PADILLA GALA PATRICIA.
    Año: 2001.
    Universidad: ALMERIA.
    Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DE JAEN, FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES.
    Resumen: El presente trabajo aporta la investigacion, resultados y discusión de la sobre-expresion de enzimas hidantoinasa y carbamilasa, utilizada en la sintesis de D y L-aminoacidos a partir de mezclas racemicas de hidantoinas. Varios aminoacidos se producen a escala industrial para su utilización en farmacia, alimentacion, agricultura, etc. Se pusieron a punto dos de las condiciones de medida de actividad hidantoinasa y carbamilasa de las diversas cepas utilizadas: la relación biomasa húmeda/tiempo de reacción y la permeabilizacion celular. Se estudiaron varias cepas silvestres para seleccionar aquellas con las enzimas hidantoinasa, D-carbamilasa y L-carbamilasa más adecuadas para su utilización futura a escla industrial. Las cinco enzimas escogidas industrial. Las cinco enzimas escogidas fueron clonadas y sobre-expresadas en Escherichia coli y Agrobacterium tumefacines. Se realizaron estudios preliminares de medida de actividad enzimática con todos los organismos recombinantes obtenidos y se escogieron tres en los que incrementó (utilizando IPTG como inductor) la actividad respecto a la de las cepas silvestres. Los tres microorganismos fueron E.coli BL21 (DE3) con la D-carbamilasa de Agrobacterium tumefaciens A158 bajo control del promotor 010 del vector pBSK y E. Coli DH5a con la L-carbamilasa de Bacillus stearothermophilus A245 bajo control del promotor lac del vector pBSK y E.coli DH5a con la hidantoinsasa de Agrobacterium tumefaciens A244 bajo control del promotor lac del vector pBSK. Con dichos organismos se llevaron a cabo experimentos de optimizacion de la expresión de las enzimas mediante diseño experimental y fermentaciones de laboratorio, a fin de obtener la maxima actividad enzimática y crecimiento posibles sin utilizar IPTG ni antibiotico.
  • ANÁLISIS Y CARACTERIZACIÓN DEL PROCESO DE MUERTE CELULAR INDUCIDO POR DERIVADOS DE BENZO(B) 1,1 DIOXIDOSULFONAMIDA CON ACTIVIDAD ANTITUMORAL .
    Autor: ALONSO ROLDÁN MARTA M..
    Año: 2001.
    Universidad: PUBLICA DE NAVARRA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: ESCUELA ENFERMERÍA UPMA.
    Resumen: En este trabajo hemos intentado caracterizar el proceso de muerte celular inducido por un grupo de compuestos derivados de benzo(b)1,1 dióxidosulfonamida (BTS), sintetizados en el departamento de Química Aplicada de la UPNA, que habían mostrado actividad antitumoral in vitro, y la búsqueda del mecanismo de acción a través del cual estos compuestos ejercen su acción citotóxica. Los resultados obtenidos demustran que los BTS inducen un proceso de muerte celular por apoptosis. El efecto antitumoral de estos compuestos parece estar mediado por un aumento en los niveles de radicales libres del oxígeno (ROS) lo que provoca una serie de alteraciones en la fisiología mitocondrial que culminan con la activación de la caspasa 3. Además estos compuestos inhiben una enzima NADH oxidasa de función desconocida y específica de céulas tumorales pero que no se encuentra en células normales. Esta enzima es la única diana celular propuesta para las diarilsulfonilureas (DSU) compuestos a partir de los cuales se han sintetizado los BTS, y para otros agentes antineoplásicos.
344 tesis en 18 páginas: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18
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