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FISIOLOGIA BACTERIANA



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  • CARACTERIZACIÓN DE GENES DE LA AGRUPACIÓN GÉNICA DCW DE BREVIBACTERIUM LACTOFERMENTUM ATCC 13869: ALTERACIONES MORFOLÓGICAS INDUCIDAS POR FTSZ Y AG84/DIVIVA .
    Autor: RAMOS CASTRO ANGELINA .
    Año: 2003.
    Universidad: LEON.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA-UNIVERSIDAD DE LEÓN.
    Resumen: Las corinebacterias son bacilos Gram-positivos, pleomórficos que se agrupan en forma de V y se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza. Tradicionalmente se han considerado microorganismos de gran interés industrial en la producción de aminoácidos y nucleótidos (Martín, 1989). La búsqueda de nuevos agentes antimicrobianos para la neutralización de la resistencia bacteriana desencadenada por el uso indiscriminado de antibióticos implica el uso de distintas estrategias, entre las que se puede destacar la identificación de nuevas dianas (como las enzimas implicadas en la biosíntesis de la capa de peptidoglicano y las proteínas implicadas en división celular) en microorganismos patógenos para el diseño de nuevos agentes antimicrobianos. El estudio de la agrupación génica dcw (división and cell wall) de B.lactofermentum respondía a la posibilidad de utilizar este microorganismo como modelo para otras corinebacterias y micobacterias patógenas responsables de importantes enfermedades en el hombre. Mediante un rastreo de una librería genómica de B.lactofermentum construida en el vector *gt11 (Honrubia et al., 1998) se han identificado los genes murD, ftsW y murG (implicados en el proceso de formación de la pared celular) y orf7, orf8 y orf9 (de función desconocida) pertenecientes a la agrupación dcw. Asimismo se ha realizado un posterior análisis de algunos de sus genes, profundizando en los genes ftsZ (que se localiza en el futuro sitio de división constituyendo una estructura citoesquelética en forma de anillo que se contrae junto con la membrana y el resto de envueltas celulares durante la formación del septo) y orf8 (que codifica una proteína implicada en el crecimiento apical de este actinomiceto) mediante el estudio de la sobreexpresión de los mismos en E.coli y B.lactofermentum y la localización celular de las correspondientes proteínas utilizando la proteína fluorescente GFP, entre otros.
  • PRESENCIA, CARACTERIZACIÓN Y FUNCIÓN EN EL DESARROLLO DE PROTEASAS Y NUCLEASAS DE STREPTOMYCES .
    Autor: HUERGO BOBES JERONIMO.
    Año: 2003.
    Universidad: OVIEDO.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: AREA DE MICROBIOLOGÍA UNIV. DE OVIEDO.
    Resumen: Los procesos de fragmentación del ADN y producción de proteasas y nucleasas muestran una coordinación durante el ciclo de desarrollo de Streptomyces antibioticus. Tras la utilización de las características bioquímicas de las nucleasas, el efecto de inhibidores sobre su actividad y diversos mutantes, se han obtenido evidencias de su implicación en la diferenciación. Tanto las nucleasas periplásmicas como las exocelulares están presentes en todas las especies de Streptomyces ensayadas, con cinéticas de producción y caracerísticas bioquímicas similares a las ya descritas en Streptomyces antibioticus. En todas las especies de Streptomyces ensayadas se ha constatado la presencia de una serina proteasa de tipo tripsina responsable de la degradación de fuentes de nitrógeno esternas. La poteasa de tipo tripsina posee una conformación monomérica y una masa molecular de 70 kDa. Requiere un aminoácido básico en la secuencia blanco del sustrato y su actividad depende en gran medida de la conformación del mismo, este último aspecto le atribuye la especificidad suficiente para actuar como un hipotético activador de las nucleares al procesar sus formas precursoras. Por último, se ha detectado una actividad proteasa de tipo caspasa den Streptomyces antibioticus y Streptomyces glucescens cuya concentración resulta más elevada en la fase de transición del micelio sustrato al aéreo y cuya función podría estar relacionada con la activación de la nucleasa de 18 kDa. Enzima de mayor relevancia en la degradación de ácidos nucleicos que tienen lugar durante la diferenciación. Los resultados en conjunto muestran el interés de Streptomyces como modelo de estudio evolutivo de alguno de los procesos centrales de la apoptosis de células eucariotas.
  • GENÉTICA DE SOLUTOS COMPATIBLES EN BACTERIAS HALÓFILAS MODERADAS .
    Autor: CALDERÓN RODRÍGUEZ M. ISABEL.
    Año: 2002.
    Universidad: SEVILLA.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DE SEVILLA.
    Resumen: La principal estrategia de osmoadaptación desarrollada por las bacterias halófilas moderadas consiste en la acumulación en su citoplasma de los denominados solutos compatibles. Estos compuestos poseen un alto poder estabilizador y protector de enzimas, ácidos nucleicos, membranas, e incluso células enteras, contra la congelación, la desecación, la desnaturalización por calor y la alta salinidad (1). La bacteria halófila moderada Chromohalobacter salexigens posee uno de los rangos salinos de crecimiento más amplios existentes en la Naturaleza, entre 0,18 y 5,5 M de NaCl (2). La acumulación de los solutos compatibles ectoína e hidroxiectoína parece ser la base fundamental de esta extremada tolerancia a la sal. En la presente Tesis Doctoral, se han clonado y secuenciado los genes responsables de la ruta de síntesis de ectoína, encontrándose un operón formado por tres genes: el gen ectA, que codifica la enzima ác.diaminobutírico N-acetiltransferasa, el gen ectB, que codifica la ác. Diaminobutírico transaminasa, y el gen ectC, que codifica la ectoína sintasa. Mediante ensayos de protección por la endonulceasa S1 y Primer Extensión, se ha identificado una región promotora delante del gen ectA, con tres posibles inicios de la transcripción, y una segunda región promotora situada delante de ectB, en la que existe un caurto inicio de transcripción. La construcción de fusiones transcripcionales de las regiones promotoras con el gen lacZ ha permitido cuantificar la actividad de las mismas en función de diversos factores, como la adición al miedo de cultivo de diversos osmoprotectores (ectoína, betaína), de un inhibidor de topoisomerasas, o de hierro, así como de la temperatura de incubación. Asimismo, la actividad de la región promotora situada delante del gen ectA presenta una clara inducción en el inicio de la fase estacionaria de crecimiento, que desaparece en un mutante RpoS- de E.coli, lo que sugiere la participación de un factor homólogo a *s, que regula la respuesta de la célula en fase estacionaria, en la transcripción de los genes ect. Por otro lado, la bataína ejerce un control post-transcripcional sobre la síntesis de ectoína, tanto a baja como a elevada salinidad. La secuenciación de la región en 5' del gen ectA ha revelado la presencia de una fase abierta de lectura incompleta, correspondiente a la glutatión reductasa de C. Salexigens. La secuenciación de la región en 3' del gen ectC ha revelado la existencia de varias fases abiertas de lectura organizadas en un operón. Algunas de llas (ORF1, 2 y 3) podrían estar relacionadas con elt ransporte de ión Fe2+ asociado a ácidos dicarboxílicos. Asimismo, dicho operón contiene el gen fur, regulador global, y un gen implicado en la biosíntesis de la histidina. La delección de la región orf123fur conduce a un fenotipo de auxotrofia a la histidina, así como un crecimiento más lento que la cepa silvestre. Asimismo, provoca una inhibición total de la transcripción de los genes de síntesis de ectoína. Finalmente, C. Salexigens es capaz de utilizar la ectoína y la hidrociectoína como fuentes de carbono y energía, aunque sólo a la concentración salina óptima de crecimiento (1,5 M de NaCl), probablemente debido a un transporte insuficiente de dichos osmoprotectores a otras concentraciones salinas. (1) A. Ventosa y col. (1998) Microbiol. Mol. Biol. Rev. 62: 504-544. (2) D.R. Arahal y col. (2001) I.J. Syst. Microbiol. 51: 1457-1462.
  • DEGRADACION DE QUITINA POR CELLULOMONAS SP. ATCC 21399. PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE SU SISTEMA QUITINOLÍTICO .
    Autor: REGUERA GUTIERREZ GEMMA.
    Año: 2000.
    Universidad: OVIEDO.
    Centro de lectura: BIOLOGIA .
    Resumen: La capacidad de degradar la quitina podría estar muy extendida entre las bacterias celulolíticas anaeróbicas de ecosistemas terrestres. Esto aportaría a estas bacterias celulolíticas una gran ventaja selectiva sobre otros microorganismos celulolíticos que dependan de otras fuentes de nitrógeno, las cuales son escasas en estos ecosistemas. Cellulomonas sp.(C. Uda) ATCC21399 es un modelo idóneo para el estudio de la degradación de celulosa y quitina ya que degrada ambos polímeros muy eficientemente, tanto aeróbica como anaeróbicamente. El análisis comparativo de los sistemas enzimáticos extracelulares empleados por esta bacteria mostró que son distintos tanto en la composición de enzimas como en su regulación por los substratos utilizados para el crecimiento. El sistema quitinolítico de esta bacteria está formado por una endoquitinasa, denominada ChiA, y una actividad exoquitinasa que formaría el producto soluble final de la degradación de la quitina, la quitobiosa. Se ha purificado y caractericado la proteína ChiA y se ha confirmado que se trata del componente enzimático principal del sistema quitinolítico de C.uda. Se ha clonado un gen, de nominado chiA, que podría codificar para esta quitinasa. La amplificación por PCR de una región de otro gen de quitinasa que sugiere que, a pesar, de la simplicidad bioquímica del sistema quitinolítico de C. Uda podrían existir más genes de quitinasas. El estudio de la formación de biopelículas de esta bacteria sobre los subtratos nutritivos(la celulosa y la quitina) permitió la identificación de una nueva quitinasa producida en respuesta a las condiciones limitantes de fuentes de nitrógeno e independientemente de las fuentes de carbono del medio de cultivo. Los resultados de este trabajo confirman el papel central que le eficiente utilización del nitrógeno, en la forma de la quitina, tiene en la supervivencia de esta bacteria celulolítica.
  • DESCRIPCIÓN DE UNA NUEVA ESPECIE DEL GÉNERO VIBRIO. DISTRIBUCIÓN Y EVALUACIÓN DE LA ESPECIFICIDAD DE HUÉSPED .
    Autor: CERDÁ CUÉLLAR MARTA.
    Año: 2000.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA (UNIV. DE BARCELONA).
    Resumen: A partir de los análisis fenotípicos y genotípicos de unas cepas bacterianas aisladas del intestino de rodaballos (Scophthalmus maximus) cultivados en piscifactoría, se describe una nueva especie dentro del género vibrio. A esta nueva especie se le dio el nombre de vibrio scophthalmi. Con el fin de estudiar la presencia y el origen de esta especie bacteriana en la microbiota asociada al cultivo lavario de rodaballo, así como estudiar si existía especificidad de huésped, se diseñó una sonda específica de especie basada en el ARNr 16S. Para ello se realizó la secuenciación del ADNr 16S y a partir del análisi de la secuencia se seleccionó un oligonucleótido /VSV3) de 24 nucleótidos de longitud. Se estudió su especificidad y sensibilidad mediante hibridación colonial e hibridación de ADN amplificado. La implantación de Vibrio scophtalmi en intestino de rodaballo se estudió en muestras de larvas procedetnes de una piscifactoría. Se pudo observa que esta especie bacteriana se acababa implantado de forma preferente en el intestino de rodaballo. Para estudiar si existía especificidad de huésped se analizaron muestras de intestino de rodaballo, doradas y lubinas procedentes de piscifactorías, así como de diferentes especies de peces procedentes de acuarios de exposición. Se pudo observar que Vidrio scophtahlmi presentaba una cierta especificidad de huésped, ya que fue detectado casi exclusivamente en las muestras de rodaballo (de piscifactoría y de acuario de exposición). Mediante estudios de fenotipado bioquímico de cepas aisladas en diferentes ambientes se observó que V. Scophthalmi presentaba una diversidad clonal baja.
  • REGULACION TEMPORAL DE LA SECRECION EN STREPTONYCES LIVIDANS: ALFA-AMILASA Y AGARASA.
    Autor: ISIEGAS GERMAN CAROLINA.
    Año: 1998.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Resumen: La búsqueda de huespedes alternativos a la bacteria Escherichia coli para expresar genes de diferentes origen ha motivado un interes creciente por las bacterias pertenecientes al género Strepytomyces, que poseen la capacidad de secretar al medio donde crecen gran cantidad de proteínas y además son inocuas. Aunque existen numerosos ejemplos de producción extracelular de proteínas heterologas en Streptomyces lividans, los rendimientos son muy variables y a veces insuficientes. El estudio de la fisiología de la secreción requiere disponer de proteínas modelo que permitan determinar los factores que la afectan, desde la transcripción del gen, hasta la aparición del producto en el medio, y por otro lado, son necesarias para caracterizar funcionalmente la maquinaria de secreción. La TEM beta-lactamasa de Escherichia coli se ha utilizado como modelo heterologo para evaluar la eficiencia de las señales de expresión y secreción del gen de la agrasa de Streptomyces coelicolor para dirigir la producción extracelular de proteínas heterologas. Además se ha clonado, secuenciado y caracterizado la expresión y secreción de un gen del alfa-amilasa de Streptomyces lividans en el huesped natural, lo que ha permitido complementar los estudios de secreción lievados a cabo con la agarasa, definiendo ambas proteínas dos momentos diferentes de secreción a lo largo del crecimiento, correspondiente a la fase exponencial y la fase estacionaria del cultivo en medio líquido..
  • EL COMPLEJO DE TRASLOCACION DE PREPROTEINA DE STREPTOMYCES LIVIDANS 1326. ANALISIS DE LOS GENES SECA, SECE Y SECY.
    Autor: BLANCO MENDAÑA JORGE.
    Año: 1997.
    Universidad: LEON.
    Centro de lectura: BIOLOGIA .
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: ECOLOGIA, GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA DE MICROORGANISMOS Y DE PLANTAS.
    Resumen: Las proteínas SecA, SecE y SecY son componentes altamente conservados de la maquinaria de exportación de proteínas bacteriana. Sus genes codificantes (secA, secE y secY, respectivamente), identificados inicialmente en Escherichia coli, han sido localizados en una amplia variedad de microorganismos, entre ellos la bacteria Streptomyces lividans (este trabajo). Se ha llevado a cabo la sobreexpresión homóloga del gen secA por aumento de la dosis génica y por sustitución de su promotor (PsecA) por promotor Psaf (uno de los promotores más fuertes conocidos en Streptomyces). A partir de la cepa sobreproductora, se ha realizado la purificación de la proteína SecA y su caracterización bioquímica: determinación de sus actividades ATPasas, estudio de su capacidad de unir nucleótidos, análisis de su cinética de unión a membranas de Streptomyces y determinación de su incapacidad para interaccionar con el chaperón molecular de E. coli SecB. Se ha llevado a cabo también la sobreexpresión homóloga de los genes secE y secY (cada uno con su propio promotor) por aumento de la dosis génica. La proteína SecY de S. lividans fue reconocida por anticuerpos anti-SecY de Bacillus subtilis. Sin embargo, SecE no reaccionó frente a anticuerpos anti-SecE de B. subtilis ni anti-SecE de E. coli. La expresión de los genes secA, secE y secY de S. lividans en mutantes de cepas de E. coli adecuadas, permitió determinar que las proteínas codificadas por ellos carecían de funcionalidad en E. coli y, además, SecE y SecY resultaban tóxicas para la viabilidad de las células de E. coli.
  • MICROMONOSPORACEAS MARINAS: AISLAMIENTO, TAXONOMIA Y PRODUCCION DE METABOLITOS CON ACTIVIDAD ANTITUMORAL.
    Autor: FERNANDEZ CHIMENO ROSA ISABEL.
    Año: 1997.
    Universidad: LEON.
    Centro de lectura: BIOLOGIA .
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: ASPECTOS BASICOS EN BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.
    Resumen: Los actinomicetos son un grupo de microorganismos productores de muchos compuestos con interés farmacológico. En esta tesis se estudió el aislamiento de actinomicetos a partir de invertebrados y algas marinas. Dentro de los actinomicetos, en esta tesis se realizó un estudio más pormenorizado de las cepas pertenecientes a la familia Micromonosporaceae. Las cepas de micromonosporáceas aisladas se analizaban para estudiar su posible actividad antitumoral. Una de estas cepas producía un nuevo macrólido con actividad antitumoral. Esta cepa se caracterizó taxonómica y filogenéticamente y resultó ser una nueva especie, que se denominó Micromonospora luedemannii. Como sistema de clasificación, se puso a punto un sistema automatizado basado en el análisis cuantitativo de la composición de azúcares celulares analizados por cromatografía de gases.
  • CARACTERISTICAS, PROCESAMIENTO PROTEOLITICO Y PAPEL EN EL DESARROLLO DE NUCLEASAS EXOCELULARES DE STREPTOMYCES ANTIBIOTICUS.
    Autor: GONZALEZ NICIEZA REBECA.
    Año: 1997.
    Universidad: OVIEDO.
    Centro de lectura: BIOLOGIA.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL.
    Resumen: Se realizo un estudio en S. antibioticus, con el fin de analizar la presencia de actividades nucleoliticas distintas a la previamente descrita en el periplasma de la bacteria. Se detectaron dos nucleasas exocelulares, de 34 kDa y 18 kDa, que fueron purificadas y caracterizadas bioquimicamente. Ambos enzimas presentan actividad endo-exonucleolitica. Hidrolizan ADN y ARN, y dejan como productos finales una mezcla de mono y oligonucleotidos. Aparecen desde el inicio del desarrollo del microorganismo y alcanzan niveles maximos en la fase de micelio aereo. Las dos nucleasas parecen tener su origen en un precursor inactivo de 74 kDa; que sufre un procesamiento proteolitico, llevado a cabo por una proteasa de tipo tripsina (TLP). La secuencia amino-terminal de la DNasa de 18 kDa es homologa a la de otras proteinas de la familia de las ciclofilinas; y la DNasa de 18 kDa presenta actividad isomerasa; lo que sugiere su relación con estas proteinas. Se propone el papel de estas nucleasas en el proceso de diferenciación del microorganismo, y la homología de estos procesos con algunos acontecimientos bioquimicos que tienen lugar durante los procesos de apoptosis de celulas eucariotas.
  • MODIFICACIONES INDUCIDAS POR SAL EN EL LIPOPOLISACARIDO Y EXOPOLISACARIDO DE RHIZOBIUM MELILOTI EFB1. ANALISIS DE UNA REGION GENICA IMPLICADA EN LA SINTESIS DE GALACTOGLUCANO.
    Autor: LLORET ROMERO FRANCISCO JAVIER.
    Año: 1997.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA.
    Resumen: Las superficies celulares de Rhizobium son esenciales en la simbiosis que mantienen estas bacterias con plantas leguminosas y en sus relaciones con el medioambiente. El estudio se ha centrado en las alteraciones en dos componentes (LPS y EPSs) de la pared de Rhizobium meliloti producidas por una alta salinidad. Se han observado modificaciones en la movilidad electroforética del LPS y en su antigenicidad provocadas por la sal. Además, existe una reducción en la producción de uno de los EPSs, el galactoglucano, en estas mismas condiciones. Se ha caracterizado una región génica implicada en la síntesis de galactoglucano y se ha mostrado que un promotor localizado en esta región responde de manera distinta en altas concentraciones salinas, demostrando una regulación transcripcional en la reducción de la producción de galactoglucano en medios salinos.
  • CARACTERIZACION DE LA AGRUPACION DE GENES DE CEFAMICINA C EN STREPTOMYCES CLAVULIGERUS.
    Autor: PEREZ LLARENA FRANCISCO JOSE.
    Año: 1997.
    Universidad: LEON.
    Centro de lectura: BIOLOGIA.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: ECOLOGIA, GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA DE MICROORGANISMOS Y DE PLANTAS.
    Resumen: En este trabajo se ha caracterizado en profundidad la agrupación de genes de cefamicina C de Streptomyces clavuligerus ATCC 27064, productor de ácido clavulánico. La secuenciación de dos fragmentos de ADN de 7.2 y 3.7 kb pertenecientes a dicha agrupación reveló la presencia de 7 marcos de lectura abiertos completos. Se han estudiado cuatro nuevos genes biosintéticos en dicha agrupación: los genes tardíos cmcI, cmcJ y cmcH y el gen temprano pcd que codifica para la piperideina-6-carboxilato deshidrogrenasa. Se ha identificado el gen ccaR, regulador positivo de la biosíntesis de cefamicina C y ácido clavulánico. Asímismo se caracterizaron los genes cmcT, pbp2 y bla posiblemente implicados en mecanismos resistencia y/o transporte del antibiótico. La beta-lactamasa codificada por el gen bla tiene muy baja actividad frente a antibióticos betalactámicos. Esta enzima es inactivada por ácido clavulánico e inhibida por la proteína Blip.
  • INFLUENCIA DEL ALPECHIN SOBRE LA MICROBIOTA DEL SUELO.
    Autor: RUIZ MOLINA MANUEL.
    Año: 1997.
    Universidad: JAEN .
    Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: CIENCIAS DE LA SALUD (AREA MICROBIOLOGIA) PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA EXPERIMENTAL.
    Resumen: Se ha realizado un estudio de la interacción alpechín-microorganismos del suelo, efectuando recuentos e identificación de los microorganismos presentes en los suelos analizados y valoración de su variación a lo largo del tratamiento con distintas concentraciones de alpechín. Las determinaciones microbiológicas efectuadas son: recuentos de microbiota total, microbiota fijadora de nitrógeno atmosférico, microbiota solubilizadora de fosfatos y microbiota Gram negativa. Los suelos analizados proceden de parcelas de cultivos de girasol, maíz y cebada, de las cuales, unas han recibido abonado mineral y otras no, y que han sido tratadas con concentraciones de alpechín que van de 0 a 300 l/m2. Los datos experimentales obtenidos indican que el vertido sucesivo de alpechín en los cultivos de girasol y en cultivos abonados enriquece el suelo con microorganismos fijadores de nitrógeno y con solubilizadores de fosfatos. La susceptibilidad de las bacterias Gram negativas al efecto antimicrobiano del alpechín es muy bajo. El vertido sobre el terreno de 100 a 300 l/m2. de alpechín no constituye una práctica peligrosa en cuanto a la influencia sobre la calidad biológica del suelo, ni determina variación alguna en la estabilidad estructural de las comunidades microbianas presentes en él.
  • CICLO DE DIFERENCIACION CELULAR DE STREPTOMYCES BRASILIENSIS EN CULTIVO LIQUIDO.
    Autor: RUEDA BERMEJO BEGOÑA.
    Año: 1996.
    Universidad: OVIEDO.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.
    Resumen: EN EL PRESENTE TRABAJO SE HA DESARROLLADO UN SISTEMA EFICIENTE DE ESPOROGENESIS EN CULTIVO LIQUIDO EN LA ESPECIE STREPTOMYCES BRASILIENSIS (ATCC23727). LA ESPOROGENESIS SE DESENCADENA TRAS CONTROLAR LOS SIGUIENTES FACTORES: FUENTE DE NITROGENO, FUENTE DE CARBONO, AGITACION Y CONCENTRACION DE INOCULO. EN ESTAS CONDICIONES DE CULTIVO, EL CICLO DE DESARROLLO DEL MICROORGANISMO CONSTA DE UNA FASE DE CRECIMIENTO VEGETATIVO, UNA FASE ESTACIONARIA Y UNA FASE DE ESPOROGENESIS. EN LA FASE VEGETATIVA LAS HIFAS MUESTRAN CARACTERISTICAS SIMILARESA LAS HIFAS DEL MICELIO SUSTRATO. SE HAN OBSERVADO POR PRIMERA VEZ LOS CAMBIOS PREVIOS A LA ESPOROENESIS, ENTRE LOS QUE CABE DESTACAR LA DISPOSICION AXIAL DEL NUCLEO PLASMAY SU POSTERIOR SEGRAGACION EN UN PLANO PERPENDICULAR AL EJE LONGITUDINAL DE LA CELULA. ESTA SERIE DE CAMBIOS CONLLEVAN A LA FORMACION DE HIFAS CON UN DIAMETRO CELULAR SUPERIOR AL DE LAS CELULAS VEGETATIVAS Y UN GROSOR DE PARED INFERIOR, CARACTERISTICAS TIPICAS DE LAS HIFAS AEREAS. LA ESPOROGENESIS EN CULTIVO LIQUIDO ES SIMILAR A LA QUE TIENE LUGAR EN CULTIVO SOLIDO; OBTENIENDO ESPORAS ESTRUCTURALMENTE IDENTICAS, QUE DIFIEREN LIGERAMENTE EN EL GROSOR DE SU PARED ASI COMO POR LA AUSENCIA DE UNA VAINA BIEN ORGANIZADA Y DEFINIDA. AMBOS TIPOS DE ESPORAS TAMBIEN POSEEN EL MISMO NIVEL DE RESISTENCIA A LA TEMPERATURA Y DESECACION, NO OBSTANTE LAS ESPORAS OBTENIDAS A PARTIR DE CULTIVO LIQUIDO SON MENOS RESISTENYES AL TRATAMIENTO CON LISOZIMA Y ULTRASONIDOS. LA PERMANENCIA CONTINUADA DE ESTAS ESPORAS EN EL PROPIO MEDIO DE CULTIVO DONDE HAN SIDO PRODUCIDAS PROVOCA SU GERMINACION PREMATURA Y LISIS, FENOMENOS PROBABLEMENTE ORIGINADOS POR EL ESTADO NUTRICIONAL DEL MEDIO DE CULTIVO. DURANTE EL CICLO DE DIFERENCIACION TANTO EN CULTIVO LIQUIDO COMO SOLIDO, S.BRASILIENSIS ACUMULA GLUCOGENO Y TREALOSA. EN AMBOS CASOS, LA DEGRADACION DE GLUCOGENO COINCIDE CON LA ACUMULACION DE TREALOSA, FENOMENO ESPECIFICO DE LA ESPOROGENESIS. LA DEGRADACION DE GLUCOGENO PARECE ESTAR INVOLUCRADA EN EL APORTE DE UNIDADES DE GLUCOSA PARA LA SINTESIS DE TREALOSA ESPORAL. LA TREALOSA PARECE MANIFESTAR UNA FUNCION MULTIPLE, PUDIENDO ACTUAR COMO CRIOPROTECTOR, OSMORREGULADOR O FUENTE DE CARBONO Y/O ENERGIA.
  • CLONACION Y CARACTERIZACION DEL OPERON DE LAS PROTEINAS RIBOSOMICAS L13 Y S9 DE STREPTOMYCES COELICOLOR A3 (2).
    Autor: SANCHEZ REILLO CESAR.
    Año: 1996.
    Universidad: OVIEDO.
    Centro de lectura: MEDICINA .
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL .
    Resumen: UN ANALISIS MEDIANTE ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL DE LAS PROTEINAS RIBOSOMICAS DE STREPTOMYCES COELICOLOR A3(2) REVELO QUE DOS PROTEINAS DEL MICELIO SUSTRATO NO SE DETECTABAN EN LOS RIBOSOMAS DEL MICELIO AEREO. A PARTIR DE LA SECUENCIA DE DOS PEPTIDOS DE UNA DE DICHAS PROTEINAS (RP3), DISEÑAMOS OLIGONUCLEOTIDOS DEGENERADOS QUE NOS PERMITIERON CLONAR SU GEN. LA SECUENCIA DE ADN MUESTRA DOS FASES DE LECTURA ABIERTA, RPLM Y RPSI, CUYOS PRODUCTOS DEDUCIDOS SON SIMILARES A PROTEINAS RIBOSOMICAS L13 Y S9, RESPECTIVAMENTE, DE DIVERSOS ORGANISMOS. EL PRODUCTO DE RPSI ES LA PROTEINA DIFERENCIAL RP3, PUES CONTIENE LAS SECUENCIAS PEPTIDICAS DE PARTIDA. EXPERIMENTOS DE MAPEO TRANSCRIPCIONAL SUGIEREN QUE RPLM Y RPSI FORMAN UNA UNIDAD TRANSCRIPCIONAL. AMBOS GENES FUERON SOBREEXPRESADOS EN ESCHERICHIA COLI Y SUS PRODUCTOS PURIFICADOS. SE EMPLEARON ANTICUERPOS POLICLONALES FRENTE A LAS PROTEINAS PURAS PARA ANALIZAR LA PRESENCIA DE AMBAS EN LOS RIBOSOMAS DE LA BACTERIA. LA CONCENTRACION DE RP3 DISMINUYE PROGRESIVAMENTE DURANTE LA TRANSICION DEL MICELIO SUSTRATO AL MICELIO AEREO, SIENDO APARENTEMENTE SUSTITUIDA POR UNA SEGUNDA FORMA DE S9 DE MENOR MASA MOLECULAR. EXPERIMENTOS DE TRANSCRIPCION-TRADUCCION ACOPLADAS SUGIEREN QUE LOS GENES RPLM Y RPSI ESTAN ACOPLADOS TRADUCCIONALMENTE.
  • ECOLOGIA MICROBIANA DE POBLACIONES DE BACTERIAS FOTOTROFICAS EN EL PLANCTON LACUSTRE: LA DISTRIBUCION ESPECTRAL DE LA LUZ EN LA SELECCION ENTRE ESPECIES CON DIFERENTE COMPOSICION PIGMENTARIA.
    Autor: VILA PORTELLA XAVIER.
    Año: 1996.
    Universidad: GIRONA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: INSTITUTO DE ECOLOGIA ACUATICA PROGRAMA DE DOCTORADO: LIMNOLOGIA GENERAL Y APLICADA.
    Resumen: SE HA ESTUDIADO LA DIVERSIDAD DE LAS COMUNIDADES DE BACTERIAS FOTOTROFICAS Y LA DISTRIBUCION ESPECTRAL DE LA LUZ EN UNA SERIE DE 41 LAGOS, PARA DETERMINAR EL EFECTO DE LA CALIDAD LUMINICA EN LA SELECCION ENTRE ESPECIES DE DISTINTA COMPOSICION PIGMENTARIA. LAS POBLACIONES MICROBIANAS SE ESTRUCTURABAN EN TRES NIVELES, A DISTINTAS PROFUNDIDADES: (I) CIANOBACTERIAS EN LA PARTE SUPERIOR, JUNTO CON EL FITOPLANCTON EUCARIOTA, (II) CROMATIACEAS Y BACTERIAS VERDES FILAMENTOSAS DEL GENERO CHLORONEMA EN LA PARTE INTERMEDIA Y (III) BACTERIAS VERDES DEL AZUFRE (CLOROBIACEAS) EN LA PARTE INFERIOR. LA COMPOSICION ESPECTRAL DE LA LUZ EN ESTOS LAGOS DEPENDE PRINCIPALMENTE DE LA PROFUNDIDAD, DE LA CANTIDAD DE SUSTANCIAS HUMICAS DISUELTAS Y DE LOS DISTINTOS TIPOS DE MICROORGANISMOS FOTOTROFICOS QUE PUEDEN DESARROLLARSE EN EL PLANCTON, QUE MODIFICAN LAS VENTANAS ESPECTRALES DE LUZ DISPONIBLE PARA LA FOTOSINTESIS. LAS POBLACIONES DE BACTERIA FOTOTROFICAS QUE SE ENCUENTRAN EN UN MISMO NIVEL METALIMNETICO COMPITEN ENTRE ELLAS PARA CAPTAR FOTONES EN FUNCION DE SU COMPOSICION PIGMENTARIA. LAS DISTRIBUCIONES ESPECTRALES ENRIQUECIDAS EN FOTONES DE LA ZONA CENTRAL DEL ESPECTRO (500-600 NM) QUE SE PRODUCEN A PROFUNDIDADES SUPERIORES A UNOS 8 M FAVORECEN LAS POBLACIONES DE MICROORGANISMOS QUE BASAN SU ESTRATEGIA DE CAPTACION DE LUZ EN LOS CAROTENOIDES Y LAS FICOERITRINAS, COMO LAS CLOROBIACEAS MARRONES, LAS CROMATIACEAS Y LAS CIANOBACTERIAS. LAS CLOROBIACEAS VERDES, LAS BACTERIAS VERDES FILAMENTOSAS Y LAS CIANOBACTERIAS QUE NO CONTIENEN FICOERITRINA, JUNTO CON LAS ESPECIES DEL FITOPLANCTON EUCARIOTA, PREDOMINAN CUANDO LA LUZ ESTA MAS ENRIQUECIDA EN FOTONES DE LONGITUDES DE ONDA LARGAS (600-700 NM), QUE PUEDEN CAPTAR CON LAS BANDAS QY DE SUS PIGMENTOS CLOROFILICOS. ESTOS RESULTADOS SE HAN CONFIRMADO CON UNA SERIE DE EXPERIMENTOS DE OXIDACION DE SULFHIDRICO REALIZADOS CON CLOROBIACEAS VERDES Y MARRONES SOMETIDAS A DISTINTAS CONDICIONES DE ILUMINACION, DE FORMA QUE EN LAS CINETICAS REALIZADAS EN LUZ ROJA SE OBTUVO UNA ACTIVIDAD OXIDADORA DE SULFHIDRICO SUPERIOR EN LOS CULTIVOS VERDES, MIENTRAS QUE LOS CULTIVOS MARRONES ERAN MAS ACTIVOS EN LUZ VERDE.
  • SUPERVIVENCIA DE ESCHERICHIA COLI Y SALMONELLA TYPHIMURIUM EN AGUA DE MAR .
    Autor: LOPEZ AMOROS RICARD.
    Año: 1995.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGIA.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL Y BIOTECNOLOGIA.
    Resumen: EL TRABAJO HA CONSISTIDO EN LA APLICACION DE DISTINTAS TECNICAS PARA EL SEGUIMIENTO DE LOS PROCESOS DE MORTALIDAD EN AGUA DE MAR DE CULTIVOS DE LAS CEPAS DE E. COLI Y S. TYPHIMURIUM EN AGUA DE MAR. SE HAN APLICADO TECNICAS TRADICIONALES DE CRECIMIENTO EN MEDIO DE CULTIVO Y TECNICAS DE CITOFLUORIMETRIA MEDIANTE LA APLICACION DE CITOMETROS DE FLUJO Y MICROSCOPIO CONFOCAL LASER. SE HA DESARROLLADO TAMBIEN LA APLICACION DE UN METODO DE AISLAMIENTO DE PLASMIDOS NATURALES A PARTIR DE ECOSISTEMAS ACUATICOS NATURALES. MEDIANTE LA APLICACION DE TECNICAS DE ANALISIS CITOFLUORIMETRICO SE HA PODIDO CUANTIFICAR LA HETEROGENEIDAD DE CULTIVOS DE LAS CEPAS TRATADAS EN CUANTO AL GRADO DE INCORPORACION DE DISTINTOS FLUOROCROMOS RELACIONADOS CON EL POTENCIAL DE MEMBRANA O CON LA INTEGRIDAD DE LA MEMBRANA PLASMATICA. EN LAS TECNICAS DE AISLAMIENTO PLASMIDICO SE HA CONSEGUIDO LA OBTENCION DE PLASMIDOS MARINOS POR EL METODO DE CONJUGACION CON UNA CEPA RECEPTORA CONTROLADA.
  • ANALISIS COMPARATIVO DE LA ORGANIZACION GENOMICA DE LA FAMILIA CHROMATIACEAE: REVISION DE SU ACTUAL CLASIFICACION.
    Autor: PAVON ANTEQUERA VICTORIA.
    Año: 1995.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA MICROBIANA.
    Resumen: SE HA REALIZADO LA COMPARACION DE LOS PATRONES DE MACRORRESTRICCION CROMOSOMICOS EN 20 CEPAS DE LA FAMILIA CHROMATIACEAE CON LOS ENZIMAS ASEI Y SPEI. LA COMPARACION DE DICHOS PATRONES A PARTIR DE DIVERSOS METODOS ESTADISTICOS HA PERMITIDO CALCULAR EL GRADO DE HETEROGENEIDAD GENOMICA DE LOS MIEMBROS DE DICHA FAMILIA Y ELABORAR DENDROGRAMAS QUE MUESTRAN LAS RELACIONES ENTRE LOS DIVERSOS GRUPOS DE CEPAS. EN BASE A LOS RESULTADOS OBTENIDOS SE HA ESTABLECIDO QUE LA TAXONOMIA DE ESTOS ORGANISMOS; BASADA EN CRITERIOS MORFOLOGICOS Y BIOQUIMICOS DEBE SER REVISADA PROFUNDAMENTE: LOS PATRONES DE MACRORRES TRICCION HAN PERMITIDO EL CALCULO DE TAMAÑO DEL CROMOSOMA EN LAS CEPAS ANALIZADAS: LOS ORGANISMOS DEL GENERO CHROMATIUM HAN PRESENTADO CROMOSOMAS ENTRE 3,4 Y 3,8 MB Y LOS PERTENECIENTES AL GENERO THIOCAPSA ENTRE 4,2 Y 4,5 MB. SE HA DETECTADO ADEMAS LA EXISTENCIA DE ELEMENTOS EXTRACROMOSOMICOS DE ALTO PESO MOLECULAR DE TOPOLOGIA CIRCULAR CON TAMAÑOS CERCANOS A 1 MB. SE HA REALIZADO EL MAPA FISICO DEL CROMOSOMA DE CHROMATIUM VINOSUM DSM 180, UBICANDO EN EL LOS GENES RRN.
  • CARACTERIZACION BIOQUIMICA Y GENETICA DE LOS SISTEMAS CONJUGATIVOS DE LOS PLASMIDOS PMB1.1 Y PMB2 EN ENTEROCOCCUS FAECALIS.
    Autor: QUIRANTES ALONSO ROSA M..
    Año: 1995.
    Universidad: GRANADA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: ECOLOGIA MICROBIANA.
    Resumen: EN ESTA MEMORIA SE HA ESTABLECIDO UNA RUTA ASEQUIBLE DE PURIFICACION DE SUSTANCIAS PEPTIDICAS DE NATURALEZA HIDROFOBA, DEL TIPO DE LAS FEROMONAS SEXUALES, LOGRANDOSE LA CARACTERIZACION DE DOS DE ELLAS, Y QUE SON RESPONSABLES DEL MECANISMO DE TRANSFERENCIA CONJUGATIVA DE DOS PLASMIDOS (PMB1.1 Y PMB2) EN ENTEROCOCCUS FAECALIS. SE HA REALIZADO ASIMISMO UN ESTUDIO BIOQUIMICO SOBRE LAS SUSTANCIAS DE AGREGACION PRESENTES EN AMBOS SISTEMAS CUANDO SON INDUCIDOS CON LAS FEROMONAS ESPECIFICAS. POR ULTIMO SE HA ABORDADO EL ESTUDIO DE LAS REGIONES GENETICAS DE PMB1.1 Y PMB2 QUE ESTAN IMPLICADAS EN LA RESPUESTA AGREGACIONAL DE AMBOS PLASMIDOS, TANTO EN LO QUE SE REFIERE A LA LOCALIZACION DE LAS SUSTANCIAS DE AGREGACION Y EXCLUSION DE AMBOS PLASMIDOS, COMO A LA CARACTERIZACION DE LAS MISMAS. SE HA ESTABLECIDO EL MAPA FISICO DE LOS PLASMIDOS PMB1.1 Y PMB2.
  • ECOLOGIA MICROBIANA EN CULTIVOS LARVARIOS DE PECTEN MAXIMUS (L.).
    Autor: RUIZ PONTE CLARA M..
    Año: 1995.
    Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
    Centro de lectura: BIOLOGIA.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MARINA Y ACUICULTURA .
    Resumen: LA PEQUEÑA TALLA DE LAS LARVAS DE BIVALVOS OBLIGA A QUE LOS CULTIVOS SE MANTENGAN EN UN MEDIO CONFINADO. ESTA TECNICA DE CULTIVO DE POR SI, ES SUSCEPTIBLE DE PROVOCAR PROLIFERACIONES BACTERIANAS. ANTE ESTO, LA PRACTICA HABITUAL HA SIDO EL USO DE ANTIBIOTICOS, LO QUE HA PROVOCADO LA SELECCION DE BACTERIAS PATOGENAS RESISTENTES. HOY EN DIA, LAS INVESTIGACIONES SE CENTRAN EN EL USO DE BACTERIAS CON EFECTOS BENEFICIOSOS PARA LAS LARVAS, CONOCIDAS COMO PROBIOTICOS. EN ESTE ESTUDIO SE AISLO UNA CEPA BACTERIANA DE ORIGEN MARINO, IDENTIFICADA COMO ROSEOBACTER SP., QUE PRESENTA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA FRENTE A UN AMPLIO ESPECTRO BACTERIANO. LO MAS NOVEDOSO ES QUE ESTA CEPA SOLO MUESTRA ACTIVIDAD INHIBITORIA CUANDO ESTA EN CONTACTO CON OTRAS CEPAS BACTERIANAS. AL PROBAR EL EFECTO DE ESTA CEPA SOBRE LOS CULTIVOS LARVARIOS, SE OBSERVO QUE EL LISADO BACTERIANO OBTENIDO A PARTIR DE CULTIVOS DE ROSEOBACTER FAVORECIA SIGNIFICATIVAMENTE LA SUPERVIVENCIA LARVARIA. ESTE RESULTADO SUGIERE QUE EL LISADO PUEDE SER UTILIZADO COMO PROBIOTICO EN CULTIVOS LARVARIOS DE PECTEN, YA QUE LA SUSTANCIA ANTIMICROBIANA PRESENTE EN EL MISMO PROTEGE A LAS LARVAS FRENTE A LA ACCION DE PATOGENOS. LOS RESULTADOS OBTENIDOS ABREN NUEVAS PERSPECTIVAS EN EL USO DE BACTERIAS COMO PROBIOTICOS EN ACUICULTURA.
  • DISTRIBUCION GEOGRAFICA Y ECOFISIOLOGIA DE LOS TAPETES MICROBIANOS DEL DELTA DEL EBRO.
    Autor: URMENETA MASO JORDI.
    Año: 1995.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGIA.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL Y BIOTECNOLOGIA .
    Resumen: LOS TAPETES MICROBIANOS SON UNAS COMUNIDADES PROCARIOTICAS BENTONICAS ESTRATIFICADAS VERTICALMENTE QUE SE DESARROLLAN EN DIFERENTES LUGARES DEL MUNDO, PRINCIPALMENTE, LAGUNAS COSTERAS, LAGUNAS HIPERSALINAS O ENDORREICAS, FUENTES TERMALES Y SURGENCIA SUBMARINAS. LOS TAPETES MICROBIANOS ACTUALES SON MUY PARECIDOS A LAS PRIMERAS COMUNIDADES BENTONICAS QUE HUBO SOBRE LA TIERRA, HARA UNOS 3.500 MILLONES DE AÑOS Y CUYOS RESTOS FOSILIZADOS CONOCEMOS COMO ESTROMATOLITOS. EN LA PENINSULA IBERICA ENCONTRAMOS TAPETES MICROBIANOS, PERO LOS MAS EXTENSOS Y BIEN DESARROLLADOS SON LOS QUE SE ENCUENTRAN EN EL DELTA DEL EBRO. EN LA PUNTA DE LA BANYA, PENINSULA SUR DEL DELTA DEL EBRO, HAY UNA GRAN EXTENSION DE TAPETES (APROXIMADAMENTE DE 3 KM2) CON DIFERENTES GRADOS DE DESARROLLO SEGUN SU LOCALIZACION Y EPOCA DEL AÑO. LOS MICROORGANISMOS QUE COMPONEN MAYORITARIAMENTE ESTOS TAPETES SON LAS CIANOBACTERIAS MICROCOLEUS CHTHONOPLASTES, LYNGBYA AESTUARII Y PHORMIDIUM SP., LAS BACTERIAS FOTOTROFICAS DEL AZUFRE CHROMATIUM SP. Y THIOCAPSA SP., LA BACTERIA OXIDADORA DEL AZUFRE BEGGIATOA SP. Y LA BACTERIA SULFATORREDUCTORA DESULFOVIBRIO SP. COMO MEDIDAS DE BIOMASA SE HAN CUANTIFICADO LOS PIGMENTOS Y EL CARBONO ORGANICO. SE HAN OBTENIDO UNOS VALORES ENTRE 6 Y 52 MG DE CARBONO ORGANICO CM-2, ENTRE 9 Y 90 MG DE CLOROFILA A CM-2, ENTRE 0 Y 45 MG DE BACTERIOCLOROFILA A CM-2 Y ENTRE 4 Y 28 MG DE CAROTENOIDES CM-2. TAMBIEN SE HA CUANTIFICADO LA PRESENCIA DE UN POLIMERO INTRACELULAR DE RESERVA, LOS POLI-BETA-HIDROXIALCANOATOS (PHA), OBTENIENDO UNOS VALORES ENTRE 28 Y 260 MG DE PHA CM-2. SE HA ESTUDIADO LA CAPACIDAD DE REGENERACION DE LOS TAPETES MICROBIANOS CON LO QUE SE HAN OBTENIDO VALORES TEORICOS DE PRODUCCION ENTRE 35 Y 315 MG DE CARBONO ORGANICO CM-2 D-1. EL ESTUDIO DE LA POSIBLE UTILIZACION DE POLIMEROS BACTERIANOS EN LA FABRICACION DE PLASTICOS BIODEGRADABLES HA EVOLUCIONADO OSTENSIBLEMENTE EN LOS ULTIMOS AÑOS. LA UTILIZACION DE PHA CON ESTOS FINES HA SIDO AMPLIAMENTE DESARROLLADA. EN ESTE TRABAJO SE HA ESTUDIADO LA CAPACIDAD DE BIODEGRADACION DE ESTOS POLIMEROS EN SEDIMENTOS ANAEROBICOS, COSTEROS Y LACUSTRES, EN RELACION CON EL CICLO DEL AZUFRE QUE SE DA EN ESTOS ECOSISTEMAS.
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