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ANTIGENOS



78 tesis en 4 páginas: 1 | 2 | 3 | 4
  • RELACIONES FUNCIONALES ENTRE LOS COMPONENTES DEL RECEPTOR MULTIMÉRICO DE LPS EN MONOCITOS HUMANOS .
    Autor: MORENO PARADO CRISTINA.
    Año: 2003.
    Universidad: NAVARRA.
    Centro de lectura: CIENCIAS .
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.
    Resumen: El lipopolisacárido es uno de los principales componentes de la superficie externa de bacterias gram negativas y constituyen un potente activador de las células del sistema inmunológico. Como consecuencia de la activación del sistema inmune se produce la liberación de mediadores pro-inflamatorios que itnervienen en la respuesta del organismo frente a la invasión de microorganismos, esta fase pro-inflamatoria es seguida por otra anti-inflamatoria, con atenuación de la respuesta inmune, en algunos pacientes puede predominar esta respuesta anti-inflamatoria induciendo un estado de inmunoparálisis, que empeora el pronóstico dramáticamente en el caso de contraer una segunda infección. Los monocitos presentan una capacidad reducida de respuesta, fenómeno que es conocido como "tolerancia a endotoxina". El receptor de LPS se ha descrito como una estructura compleja formada por una molécula reconocedora (CD14) y un complejo señalizador (TLR4/MD2). Además de la forma de membrana se ha descrito la presencia de CD14 soluble, responsable de la activación por LPS de células que no expresan CD14 en la membrana. Recientemente se ha descrito en humanos el papel de la familia de los receptores toll-like (TLRs) como reconocedores y activadores en respuestas a antígenos microbianos. En concreto, el TLR4 es una proteína transmembrana tipo I, con dominios extracelulares ricos en leucina y dominios citoplasmáticos conservados con homología con ILR1. El objetivo de este proyecto fue estudiar el papel de la molécular TLR4 como señalizador en la activación por LPS tanto en monocitos humanos que expresan CD14 de membrana como en monocitos deplecionados que se activan vía CD14 soluble, modelo que implica el tratamiento con brefeldina como agente bloqueador de la exocitosis para conseguir una regulación negativa de la expresión del CD14 de membrana. Dado el papel central del monocito en la respuesta inflamatoria estudiamos las relaciones funcionales entre los distintos componentes del receptor multimérico. Hemos comprobado que el lipopolisacárido regula negativamente la expresión de TLR4 en la membrana de monocitos humanos y que dicho efecto desaparece doce horas después de la exposición a LPS. En monocitos humanos en los que hemos inducido el fenómeno de tolerancia a LPS mediante lipopolisacárido o con citoquinas inmunosupresoras (IL-10 y TGF-beta1), se observa una regulación negativa de TLR4 en la membrana de las células. A diferencias del LPS, las citoquinas inmunosupresoras no afectan directamente a la expresión de TLR4 en la membrana, lo que sugiere la presencia de otros mecanismos implicados en la tolerancia a LPS en este modelo. Por otra parte, hemos observado que la eliminación del CD14 de membrana en monocitos humanos no se acompña de alteraciones en la expresión de TLR4, lo que apoya la posibilidad de que la asociación de CD14 y TLR4 para formar el receptor multimérico de LPS s eproduca en la membrana de CD14, el LPS no interacciona directamente con TLR4. Únicamente en presencia de suero observamos una regulación negativa de TLR4 por el lipopolisacárido. Hemos comprobado qu este descenso en la intensidad de expresión de TLR4 inducido por el LPS en presencia de suero, puede ser bloqueado añadiendo al medio de cultivo anticuerpos anti CD14, lo que demuestra que el efecto del suero esta mediado por la presencia de CD14 soluble. El hecho de que complejos LPS-sCD14 interaccionen con TLR4 y regulen negativamente su expresión es una nueva evidencia sobre la funcionalidad del receptor de LPS en células carentes de CD14.
  • IDENTIFICACIÓN DE NUEVOS ANTÍGENOS PARA EL DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE LA LEISHMANIASIS VISCERAL .
    Autor: EL BALI MOHAMMED.
    Año: 2002.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
    Resumen: Las leishmaniasis son un grupo de enfermedades causadas por un protozoo del género Leishmania, que afectan a más e 14 millones de personas, con 400.000 casos nuevos cada año, actualmente con tendencia a un fuerte incremento por su asociación al SIDA. La leishmaniasis visceral (LV) es una forma extendida por muchas zonas, entre ellas la cuenta mediterránea dónde se debe a L.infantum y puede ser mortal sin tratamiento. Las técnicas serológicas más comunmente aplicadas al diagnóstico de la LV son: la inmunofluorescencia indirecta, ELISA, el Western Blot y el test de aglutinación directa. Estos métodos utilizan como antígenos parásitos completos o extractos solubles de los mismos que presentan problemas fundamentalmente de especificidad. Por ello nos propusimos identificar y caracterizar nuevos genes de L.infantum que codifiquen proteínas antigénicas de interés diagnóstico empleando herramientas de biología molecular y su validación mediante ELISA con sueros de enfermos con LV y otras patologías que suelen presentar reacciones cruzadas con la leishmaniasis. El inmunocribado de una genoteca de expresión de L.infantum nos permitió la identificación de un gran número de clones altamente inmunogénicos, cuyos análisis selectivo mediante Southern-Blot y immuno-dot-blot permitió la elección de seis nuevas moléculas: dos moléculas cuyas secuencias presentaron alta homología con la nucleósido difosfato kinasa (NDPk) y la poli-ubiquitina (pUbq), así como cuatro nuevas moléculas, númeradas arbitrariamente 75, 222, 229 y 241, que no presentaron homologías significativas con las secuencias disponibles en los bancos de secuencias. Las moléculas 75, 222 y 229 están formadas por secuencias repetidas con un alto índice de antigenicidad teórico. Los antígenos recombinantes NDPk, pUbq y 241, y la mezcla de dos péptidos sintéticos, 75R1+222R1, sintetizados a partir de las secuencias repetidas de las moléculas 75 y 222, presentaron en el diagnóstico serológico de la LV una sensibilidad del 65%, 85%, 86% y 49%, y una especificidad del 90%, 88%, 89% y 83%, respectivamente. Siendo así, las moléculas de pUbq, 241, y sobre todo la combinación de los péptidos 75R1 y 222R1, importantes candidatos para el diagnóstico serológico de la LV.
  • VACUNACIÓN TERAPEUTICA CON CELULAS TUMORALES COMPLETAS Y CELULAS DENDRITICAS EN EL MELANOMA MALIGNO .
    Autor: BENITEZ RIBAS DANIEL.
    Año: 2002.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.
    Resumen: La identificación de antigenos específicos asociados a diversos tipos de tumroes, ha permitido su utilización en vacunaciones terapeuticas en cáncer. El melanoma maligno es un tumor con una creciente incidencia, para el cual no existen tratamientos eficaces. Con el objetivo de preparar una vacuna se obtuvieron lineas tumorales estables en cultivo, a partir de exeresis de diferentes localizaciones. Se han seleccionado 10 líneas para componer la vacuna, en función de sus características y su negatividad a controles microbiológicos. Se ha aplicado la vacuna a un grupo de 38 pacientes con enfermedad o sin ella al inicio de las vacunas. Hay un 26% de respuestas clínicas de las que destacan 3 completas. También se han observado una tendencia al aumento de supervivencia. Algunos parámetros inmunitarios se hayan aumentados, aspecto que permitiria correlacionar la respuesta inmunitaria con la respuesta clínica. También se han introducido las células dendríticas como adyudantes naturales de las vacunas para aumentar su eficiencia. De destacan respuestas clínicas objetivables y un aumento de la respuesta inmunitaria. En ningun caso, las vacunas o células dendríticas se han asociado con efectos secundarios tóxicos. Este aspecto permite continuar su uso.
  • REGULACIÓN DE LOS LINFOCITOS B Y T SOBRE EL REPERTORIO T ESPECÍFICO DE SUPERANTÍGENOS ENDÓGENOS, PRESENTADOS EN CONDICIONES DE BAJA AFINIDAD .
    Autor: IZCUE CASTELLVÍ ANA M..
    Año: 2002.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: BIOLOGÍA MOLECULAR.
    Resumen: La activación y control de los linfocitos T alfa beta+ se ha estudiado principalmente en respuesta a estímulos de alta afinidad; sin embargo, las respuestas a estímulos de baja afinidad permiten disecar mecanismos reguladores que no son aparentes en los primeros. En esta tesis se analiza el repertorio de Vbeta de ratones C57BL/6, cuyos superantígenos endógenos son presentados en condiciones de baja afinidad, y se compara con el de ratones C57BL/6 que carecen de linfocitos B o de linfocitos T gamma*+, lo que permite sacar a la luz los efectos de estados dos subpoblaciones. Los linfoctios B ejercen un efecto de selección negativa sobre las células T alfa beta+ específicas de superantígeno, mientras que los linfocitos T gamma*+ ejerce un efecto en sentido contrario. Este efecto tiene lugar tanto en timo como en la periferia, actúa en dos fases a lo largo del desarrollo del individuo y las dos poblaciones actúan por mecanismos independientes.
  • REGULACIÓN DE LA LISIS DE CÉLULAS DE MELANOMA MEDIANTE COESTIMULADORES Y RECEPTORES INHIBIDORES DE LA CITOTOXICIDAD .
    Autor: GARCÍA CASADO JAVIER.
    Año: 2002.
    Universidad: CORDOBA.
    Centro de lectura: MEDICINA .
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA.
    Resumen: El sistema inmune a través de la inmunidad celular juega un papel importante en el reconocimiento y eliminación de células tumorales. La respuesta inmune celular requiere un reconocimiento específico del tumor seguido de una fase de diferenciación y activación que finaliza con la inducción de la lisis del tumor. El estudio de marcadores de diferenciación y activación de los linfocitos T CD8 de enfermos de melanoma así como el análisis fenotípico y funcional de moléculas coestimuladoras y receptoras reguladores de la citotoxicidad en estas células nos ha permitido un mejor conocimiento de la respuesta inmune antitumoral. En los linfocitos T de pacientes de melanoma existe una alteración en el balance señales de inhibición-activación de la citotoxicidad que es debida a la expresión de receptores NK inhibidores de la citotoxicidad y a la pérdida de moléculas coestimuladoras. Estas alteraciones podrían favorecer el desarrollo tumoral en estos pacientes y están correlacionados con el grado de diferenciación hacia linfocitos efectores/citotóxicos.
  • ESTUDIO DE LOS PRECURSORES Y LA DIFERENCIACIÓN DE LAS CÉLULAS DENDRÍTICAS EN EL RATÓN .
    Autor: MARTÍNEZ DEL HOYO CAÑIZARES GLORIA.
    Año: 2001.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: Las respuestas inmunes in vivo frente a tumores e infecciones virales o bacterianas se basan fundamentalmente en el reconocimiento de un péptido antigénico presentado a los linfocitos T por células presentadoras de antígeno. La función de presentación antigénica es llevada a cabo en el organismo principalmente por las células dendríticas, que constituyen la población más eficaz de células presentadoras debido a su extraordinario potencial en la iniciación y regulación de las respuestas inmunes mediadas por células T. El origen a partir de sus precursores de las células dendríticas constiuye actualmente un campo de investigación de especial importancia en Inmunología, debido a su relevancia en relación con la diferenciación de las células dendríticas in vitro para su aplicación posterior en protocolos de inmunoterapia antitumoral o su enfermedades autoinmunes. A pesar del esfuerzo realizado por distintos grupos de investigación por definir el origen de las distintas poblaciones de células dendríticas, los resultados obtenidos hasta el momento son ciertamente controvertidos, no pudiéndose establecer conclusiones definitivas en este aspecto. El trabajo presentado en esta Tesis Doctoral aborda el tema de la generación de células dendríticas a partir de distintos precursores utilizando un modelo murino, para intentar, por una parte, identificar la vía de diferenciación fisiológica de estas células, así como analizar la pertenencia a un linaje hematopoiético determinado. En este sentido hemos descrito un precursor exclusivo de este tipo celular. También se ha realilzado una caracterización de las distintas subpoblaciones de células dendríticas presentes en el ratón, definiéndose las relaciones existentes entre ellas en términos de función y linaje. En base a los resultados obtenidos en este trabajo, se pueden extraer una serie de conclusiones principales, al demostrar que las distintas poblaciones de células dendríticas descritas ex vivo en el ratón pueden diferenciarse a partir de un mismo tipo de precursores y por tanto no corresponden a linajes hematopoiéticos independientes, y se puede proponer un modelo acerca de la diferenciación in vivo de estas células, basado en la contribución múltiple de distintos precursores en función de una situación fisiológica de inflamación o respuesta o la localización anatómica de la célula en cuestión.
  • GENERACIÓN PROTEASÓMICA DE LIGANDOS NATURALES DE HLA-B27 Y MODULACIÓN DEL REPERTORIO PEPTÍDICO POR POSIBLES FACTORES PATOGENÉTICOS .
    Autor: ÁLVAREZ PÉREZ IÑAKI.
    Año: 2001.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: CENTRO DE BIOLOGÍA MOLECULAR "SEVERO OCHOA".
    Resumen: HLA-B27 es una molécula de clase I con una relevancia adicional por estar fuertemente ligada a un conjunto de enfermedades, denomiadas genéricamente espondiloartropatías. Al menos algunas de estas enfermedades, como la artritis reactiva, se desencadenan tras la infección con determinados patógenos intracelulares, entre los que se encuentra Salmonella typhimurium. Se ha estudiado como se modula el repertorio peptídico unido a HLA-B27 en células linfoides infectadas por S.typhimurium. Se ha visto que este patógeno penetra en dichas células pero no se reproduce en su interior. Además, la expresión en superficie de HLA-B27 no afecta a la invación por S.typhimurium. Finalmente, un análisis sistemático por espectrometría de masas indicó que la invasión de células linfoides por S.typhimurium no modifica en gran medida el repertorio peptídico unido a HLA-B27. La cisteína 67 es una característica estructural casi específica de HLA-B27 y es altamente reactiva. Se ha implicado este residuo en la formación de homodímeros de cadena pesada y en el misfolding de HLA-B27. Se ha estudiado el papel de dicho residuo en la biología de HLA-B27, mediante el análisis de un mutante en el que se había sustituido la Cys67 por Ser67. El análisis del mutante por citofluorímetría con diversos anticuerpos monoclonales indicaron una menor estabilidad de HLA-F27 en superficie frente a la molécula salvaje. Además un estudio exhaustivo por espectrometría de masas de los repertorios peptídicos unidos a HLA-B*2705 y al mutante C67S reveló un alto grado de solapamiento peptídico, pero el muntante perdía la capacidad de unir un 15% de los péptidos que se unían a HLA-B*2705 y ganaba la capacidad de unir un porcentaje similar de nuevos péptidos. Se confirmó por primera vez la unión de péptidos que perdían el residuos canónico Arg2 a HLA-B*2705, uniendo péptidos con Gln2. El mutante unió un péptido con Lys2, lo que parece indicar una especificidad más relajada del pocket B. El estudio por ensayos de citotoxicidad clásicos indicaron que el mutante varía las características antigénicas de HLA-B27. En tercer lugar se analizó la generación de ligando naturales de HLA-B27 por digestiones con el proteasoma 20S in vitro. Se observó la generación directa de un péptido que era el epítopo reconocido por un clon alorreactivo obtenido contra HLA-B*2705, una extensión C-terminal del mismo, un ligando natural de HLA-B39 acetilado en su extremo amino, dos ligandos procedentes de HLA-B27, con homología con proteínas de bacterias Gram-negativas y un ligando proveniente de una región polimórfica de moléculas de clase I. Además, las digestiones in vitro con proteasoma 20S de precursores peptídicos permitió predecir dos nuevos ligandos de HLA-B27.
  • DECISIONES EN LOS MACROFAGOS: PROLIFERAR, ACTIVARSE O MORIR .
    Autor: COMALADA VILA MÓNICA.
    Año: 2001.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: El objetivo de esta Tesis es estudiar aspectos de la biología de los macrófagos, células clave en el desarrollo de la respuesta inmunitaria. Los macrófagos se caracterizan por ser células que en los tejidos se encuentran proliferando y manteniendo su viabilidad gracias a la presencia de factores de crecimiento. Sin embargo, cuando reciben un estímulo activador, ya sea el IFN-gamma, principal activador endógeno de los macrófagos o bien el LPS, componente de las bacterias Gram negativas, dejan de proliferar y pasan a activarse y a desarrollar sus funciones características, como son la expresión de citocinas proinflamatorias (como el TNF-alfa II-1beta, IL-6), la producción de NO o bien la expresión de las moléculas del MHC II. En algunos casos, por ejemplo en ausencia de factores de crecimiento o bien estimulados con LPS, los macrófagos experimentan apoptosis o muerte celular. Este trabajo se ha centrado en estudiar las diferentes vías de señalización que participan en las distintas respuestas de los macrófagos (como proliferación, activación, supervivencia y apoptosis). En este sentido se ha demostrado que la vía de señalización de MEK/ERK es esencial para los procesos de proliferación y activación, aunque lo hace con una cinética distinta. Mientras que estímulos proliferativos generan un pico corto y rápido de activación, estímulos que inducen la activación de los macrófagos como por ejemplo el LPS, la cinética de activación de estas quinasas es más tardía. Esta cinética de activación de ERK diferencial nos permite discernir entre estímulos proliferativos y activadores. Además se ha demostrado que el IFN-gamma, aunque no activa a las quinasas ERK, induce un alargamiento en el tiempo de la activación de estas quinasas a través de inhibición de la expresión de MKP-1 inducida por factores de crecimiento. El alargamiento de actividad de ERK, inhibe la expresión de c-myc, proteína indispensable para la progresión del ciclo celular y por tanto inhibe la proliferación de los macrófagos. Por otro lado, hemos demostrado que la vía de señalización de PI-3K/AKT es la responsable de la expresión de p21Walf1 y responsable de la respuesta de supervivencia de los macrófagos debida a factores de crecimiento y otros agentes. También hemos visto que la ciclosporina, un inmunosupresor ampliamente utilizado para evitar el rechazo de los transplantes, inhibe la actividad de ERK inducida por el M-CSF lo que produce un bloque de la proliferación. Este efecto es independiente de la fosfatasa Calcineurina, principal diana de la ciclosporina. Además, también se ha analizado como el entorno celular pude afectar a las respuestas de proliferación y activación de los macrófagos. Se ha demostrado que un aumento de adhesión producido por la decorina y fibronectina inhibe la proliferación de los macrófagos a través de la expresión de p27 Kip1 y la prolongación de la actividad ERK. La decorina aumenta la activación de los macrófagos a través del secuestro del TGF-beta producido de forma endógena por estas células. Por último el LPS, aunque es un buen activador de los macrófagos, induce apoptosis en determinadas situaciones, por ejemplo cuando dicha estimulación se produce de forma incorrecta, es decir, en ausencia de IFN-gamma o bien debido a dosis elevadas de LPS, responsables del sock séptico. La apoptosis inducida por el LPS se da a través de dos vías de señalización independientes. Una primera vía más temprana debida a la secreción autocrina de TNF-alfa y una segunda vía más tardía, basada en la producción de NO. La apoptosis de los macrófagos inducida por el LPS se da principalmente a través de la producción de TNF-alfa que esta regulada mayoritariamente por PKC* a través de la modulación de la actividad JNK.
  • ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN DE MOLÉCULAS COESTIMULADORAS EN CÉLULAS T HUMANAS ACTIVADAS .
    Autor: ROMERO BLANCO M. PILAR.
    Año: 2001.
    Universidad: CORDOBA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA.
    Resumen: La activación de la célula T requiere además del reconocimiento del complejo péptido antigénico-MHC por el complejo formado por TCR y CD3, de una señal coestimuladora o segunda señal, proporcionada por la interacción de moléculas presentes tanto en la superficie de la célula T como de la célula presentadora de antígeno. Recientemente, se ha descrito una pléyade de receptores de membrana capaces de actuar como moléculas coestimuladoras en diferentes estadios del proceso de activación/diferenciación de la célula T. Entre ellos se encuentran los receptores CD94 y NKG2, de la familia de las lectina C, ampliamente estudiados en poblaciones citotóxicas (células NK y linfocitos T CD8+), no así en células T CD4+, en las que estos receptores no han sido estudiados hasta el momento, a pesar del papel fundamental de esta subpoblación linfocitarias en la respuesta inmune. Por ello, en este trabajo hemos investigado la capacidad de linfocitos T CD4+ para expresar de novo receptores CD94 y NKG2 en respuesta a estímulos de diferentes naturaleza (anti-CD3, superantígenos, ésteres de forbol e ionóforos del calcio), demostrando que en respuesta a su activación, las células T CD4+ expresan de novo receptores CD94 y NKG2A en superficie. Esta expresión es regulada positivamente por IL-10. Mediante RT-PCR demostramos que todos los miembros de la familia NKG2 (NKG2-A, -C, -D, -E) son expresados secuencialmene en células CD94+ activadas. Seguidamente, estudiamos el significado funcional de los receptores CD94/NKG2 en la subpoblación CD4+, demostrando que la señalización conjunta de CD3 y NKG2 mediante anticuerpos monoclonales específicos inhibe la producción de IFN-gamma y TNF-alpha (dos citoquinas Th1), pero no afecta a la producción de otras citoquinas consideradas Th2. Por tanto la presencia y función de los receptores CD94/NKG2 en linfocitos CD4+, apoya un papel más general de estos receptores, cuyas función dentro del sistema inmune fue originalmente confinada a las células citotóxicas.
  • MECANISMOS TRANSCRIPCIONALES IMPLICADOS EN LA REGULACION DEL ANTIGENO LINFOCITARIO CD69. EFECTO DE DISTINTOS AGENTES INMUNOMODULADORES.
    Autor: CASTELLANOS MAROTO M. CARMEN.
    Año: 2000.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: SERVICIO DE INMUNOLOGIA; HOSPITAL DE LA PRINCESA.
    Resumen: CD69 es el antigeno de activacion linficitario que aparece mas rapido en la superficie celular tras un estimulo. Decidimos llevar a cabo una caracterizacion funcional de su promotor mediante el uso de distintas drogas inmunomoduladores. Inicialmente observamos que el antioxidante PDTC inhibia la aparicion en superficie de la molecula de activacion CD69 en celulas Jurkat T y en linfocitos de sangre periferica activados con PMA e ionoforo, efecto que asi mismo tenia lugar a nivel transcripcional. Al realizar ensayos de cambio de movilidad electroforetica(EMSA) observamos que la accion de este grupo de antioxidantes sobre la capacidad de union de los factores AP-1 y NF-kB de la molecula CD69 a su secuencia de DNA daba cuenta de la actividad transcripcional obtenida en los experimentos de actividad luciferasa. Asi mismo, comprobamos que estos agentes producian un aumento en superficie de CD69 por si mismos, lo que tambien era debido a un efecto a nivel transcripcional. Esta activacion estaba acompañada de un aumento en la unión de miembros de la familia fos y jun a un sitio consenso AP-1 de la region proximal del promotor de CD69. La transactivacion que producia el vector de expresion de c-jun sobre el promotor de CD69 en celulas F9, deficientes en AP-1, confirmo los datos. La mutagenesis del sitio AP-1 no modifico sustancialmente la induccion mediada por PMA mas ionoforo. Mediante EMSAs con oligos solapantes de la zona proximal del promotor, observamos la existencia de tres nuevos complejos inducibles que correspondian a Egr-1/Egr-3,Egr-1 y ATF3/fos. La mutagenesis de los nuevos sitios caracterizados resulto en una perdida parcial de la induccion de Cd69 por PMA mas ionoforo de calcio, mientras que la mutagenesis de los tres sitios a la vez inhibió casi completamente la actividad inducible del promotor. Por otra parte, con el fin de diseccionar la importancia de la ruta del calcio en la inducción de CD69 estudiamos el efecto que tiene la ciclosporina (CsA) sobre el promotor de esta molecula. Observamos que esta sustancia producia una inhibición bastante marcada sobre todas las construcciones del promotor de CD69, luego el efecto de la CsA tambien parecia localizarse en la region proximal del promotor. Por esto decidimos investigar si el factor de transcripcion Egr-1, responsable en parte de la inducibilidad del promotor de CD69, tambien pudiera ser responsable del efecto de la CsA. Asi comprobamos que esta sustancia producia una fuerte inhibicon sobre la transactivacion que produce el PMA mas ionoforo sobre un plasmido reportero de Egr-1. Sin embargo este efecto no se veia ni a nivel de expresion de la proteina ni tampoco disminuia la union a ADN de este factor. Estos resultados nos llevaron a pensar que el efecto de la ciclosporina pudiera consistir en bloquear una modificacion postrduccional sobre Egr-1, como pudiera ser una fosforilacion. En efecto, mediante experimentos de quinasa in gel observamos la existencia de una quinasa con tamaño entre 38-50 kD que fosforilaba Egr-1 cuando cotratabamos las celulas con el doble estimulo de PMA mas calcio, y que ademas era inhibible por CsA. Por otra parte, el efecto de la CsA parecia localizarse a nivel de la zona represora existente en Egr-1.
  • ESTUDIO DE LA CAPACITACIÓN DEL ESPERMATOZOIDE Y COMO LAS INTERACCIONES EMBRIÓN-ENDOMETRIO PUEDEN INHIBIRSE POR LA PRESENCIA DE UNA RESPUESTA AUTOINMUNITARIA .
    Autor: IBORRA OBIOLS ANTONIO .
    Año: 2000.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGIA FUNDAMENTAL EDFC.
    Resumen: En este trabajo de Tesis, se han estudiado antígenos involucrados directamente en reproducción humana. El éxito reproductivo se consigue en el momento del parto, cuando el bebe nace y empieza el viaje de su vida. Para que este viaje sea posible, otros viajes han sucedido préviamente. Viajes de los que, desde hace tiempo, nuestro grupo de investigación está interesado en conocer mejor su recorrido y que se muestran en el presente trabajo. La fecundación es el resultado de la fusión de un espermatozoide y el oocito. Con el eyaculado, millones de espermatozoides se depositan en la vagina, de éstos, unos miles viajan a lo largo del tracto reproductor femenino hasta llegar a las trompas de Falopio, donde exclusivamente uno sólo de ellos fecundará al oocito. Es un viaje largo, para el que los espermatozoides se han preparado con antelación a su inicio. Cómo?. En el eyaculado, diferentes moléculas del plasma seminal se adhieren a la membrana plasmática del espermatozoide. Estas moléculas confieren protección, se desprenden a lo largo del camino, y finalmente actuan como primeros receptores en la interacción con el oocito, posibilitando una fecundación exitosa. En este trabajo de Tesis hemos investigado como y cuando se desprenden algunas de estas proteinas (SEM-12, H25 y AWN-1), cómo son adsorbidas por el epitelio del tracto reproductor femenino, cómo si no se disocian se afecta la funcionalidad espermática inhibiendo la reacción acrosómica. También se ha estudiado la relación existente entre la salida de proteinas del plasma seminal y el estado fusogénico de la membrana del espermatozoide, y como la salida de colesterol favorece la inducción de la reacción acrosómica. Los experimentos realizados en esta Tesis Doctoral, nos han permitido conocer mejor estas moléculas y su importancia en fecundación en estudios realizados in vitro así como en condiciones in vivo. Una fecundación exitosa, garantiza una gestación a término?. Una vez se realiza el proceso de la fecundación empieza un nuevo viaje. En esta nueva aventura el personaje principal es el embrión que irá dividiendose hasta el estado de blastocito, momento en el que implantará en el útero. Esta demostrado que algunas patologias del tracto reproductor femenino pueden resultar en una disminución de la taxa de implantación. En este trabajo, se demuestra la existencia de una respuesta autoinmunitaria contra estructuras propias del endometrio en relación al avance de la serveridad de la patología. La presencia de autoanticuerpos, unidos a antígenos endometriales, podría explicar la inhibición de la implantación por el bloqueo físico de receptores?. Los resultados obtenidos permiten dirigir la futura investigación en esta línea sobre la hipótesis que, préviamente al proceso autoinmunitario, existe una modificación de antígenos propios capaz de alterar su funcionalidad. Podemos afirmar que la respuesta autoinmunitaria contra estructuras propias del tracto genital femenino es una consecuencia del desarrollo de una patología ginecológica. La baja implantación podría explicarse la pérdida de funcionalidad del antígeno modificado o por la unión de autoanticuerpos a éllos.
  • USO DEL RECEPTOR DE ANTIGENO DE LA CELULA T (TCR) EN PROCESOS PATOLOGICOS. ESTUDIOS EN LA ENFERMEDAD DE INJERTO CONTRA HUESPED AGUDA (AEICH) Y EN ESPONDILOARTROPATIAS .
    Autor: TREVIÑO AVELLANEDA MIGUEL ANGEL.
    Año: 1999.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: QUIMICA.
    Centro de realización: DPTO. INMUNOLOGIA, FUNDACION JIMENEZ DIAZ.
    Resumen: Las células T respnden a antígenos tras reconocerlos a través de sus receptores de antígeno de la célula T (TCRs), complejos altamente polimórficos y clonalmente distribuidos con una elevada especificidad antigénica. La existencia de enfermedades en las que se ha descrito la existencia de daños tisulares infiltrados pro células T indica la posible implicación de éstas en el proceso patogénico que conduce al desarrollo de la afección, probablemente mediante el reconocimiento y respuesta contra antígenos localizados en los tejidos afectados. La presente investigación se centra en el estudio de los TCRs en diferentes patologías: en efermedad de injerto contra huésped aguda (aEICH) y en esponfiloartropatías. El estudio de las células T en infiltrados de piel de enfermos afectados por aEICH ha revelado que todas las células T aisladas responden a alelos HLA expresados por el receptor pero no por el donante, que sus TCRs son extremadamente heterogéneos y que su espcialidad de tejido parece relacionada con el reconocimiento de antígenos específicos de tejido. El estudio de las espondiloartropatías revela la existencia de expansiones oligoclonales entre los TCRs expresados por las células T de las muestras locales que indican la implicación de células T específicas de antígenos convencionales en el desarrollo y mantenimiento de estas enfermedades. Las células que expresan uno de los TCRs específicamente aumentados en las lesiones fueron capaces de responder contra células propias, lo cual apunta a que las enfermedades de este grupo pueden ser de origen autoinmune.
  • "REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE CD40L(CD154) EN CÉLULAS T ADULTAS Y NEONATALES. IMPLICACIÓN DE PKA EN LINFOCITOS T CD4+" .
    Autor: SUAREZ DIAZ ANA.
    Año: 1999.
    Universidad: OVIEDO.
    Centro de lectura: MEDICINA .
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: El CD40L, una glicoproteína de membrana que se expresa fundamentalmente en la superficie de los linfocitos T CD4+ activados, se induce en células adultas tras el entrecruzamiento del TCR, que incrementa el Ca++ intracelular y activa la PKC. En este trabajo se muestran los efectos transcripcionales y postranscripcionales implicados en la expresión de CD40L tras la activación con ionomicina y PMA. Además hemos encontrado que la activación de PKA, en conjunción con la ionomicina, incrementa la expresión de esta molécula mediante mecanismos postranscripcionales. Los linfocitos T neonatales presentan una reducida expresión de CD40L tras la activación de PKC comparada con la observada en linfocitos T CD45RA+adultos. Sin embargo, la estimulación con ionomicina y agentes que aumentan el AMPc intracelular da lugar a unos niveles similares a los encontrados en linfocitos T adultos. El AMPc ejerce además otro efecto sobre los linfocitos T virgenes(CD45RA+) ya que cuando está presente durante la estimulación a través del CD3 induce la expresión de citocinas Th2 y de moléculas de adhesión pero impide la adquisición del fenotipo de memoria/efector CD45RO+.
  • EL CICLO CELULAR COMO REGULADOR DE LA ACTIVIDAD DE LOS MACROFAGOS.
    Autor: XAUS PEY JORDI.
    Año: 1998.
    Universidad: BARCELONA .
    Centro de lectura: BIOLOGIA.
    Resumen: Los macrófagos proliferan en presencia de M-CSF, sin embargo, bajo un estímulo de activación como el IFN o el LPS, los macrófagos dejan de proliferar y pasan a desarrollar sus funciones especígicas. Aunque inicialmente estos dos procesos, proliferación y activación, fueron considerados independientes, algunos trabajos recientes muestran la existencia de una intercomunicación entre el estado proliferativo de una célula y su capacidad de activación. EL objetivo de este trabajo era analizar las relaciones existentes entre la proliferación de los macrófagos, su activación y la inducción de apoptosis. En este sentido hemos observado que la activación de los macrófagos por LPS o IFN inhibe la proliferación de los macrófagos aunque lo realizan por mecanismos distintos. Además, mientras que la activación por LPS va asociada a la inducción de apoptosis, el IFN tiene un efecto protector frente a la apoptosis inducida frente a diversos estímulos. El efecto protector de IFN está mediado por su actividad sobre diversos componentes del ciclo celular. Además del efecto del ciclo celular sobre la regulación de la apoptosis, también hemos observado que éste puede jugar un papel en la modulación de la activación de los macrófagos. Así, el bloqueo del ciclo celular por agentes inhibidores de la proliferación de los macrófagos, como por ejemplo por el propio LPS o por agentes capaces de incrementar los nvieles de AMPc como la adenosina, es, a su vez, inhibidor de la expresión de las moléculas del MHC de clase II inducidas por el IFN- . En conclusión, la regulación del ciclo celular está involucrada en la modulación de los procesos de activación y apoptosis en los macrófagos, y por tanto, en la resolución de la respuesta inflamatoria.
  • CARACTERIZACION DE UN NUEVO FACTOR DE TRANSCRIPCION HUMANO DEL TIPO BHLH COMO UN ANTOANTIGENO DOMINANTE EN LA ENFERMEDAD DE CHAGAS.
    Autor: RODRIGUEZ LOPEZ CLARA ISABEL.
    Año: 1998.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Resumen: La enfermedad de Chagas está causada por el protozoo emoflagelado Trypanosoma cruzi, el cual es el principal responsable de la mortandad por cardiopatías en America Latina. En el rastreo de una genoteca de expresión de ADNc de la línea linfoblástica Jurkat mediante la utilización de sueros de pacientes chagásicos hemos aislado 2 clones, 7.1.2 y 9.1.2. Elclon 9.1.2 corresponde a un nuevo gen al que denominamos Cha 9.1.2. Dicho gen es de copia única y muestra una expresión tisular ubicua. Los ensayos de expresión demuestran que codifica dos proteínas: cha 912 (34 kDa) y CIR (20 kDa). Hemos determinado el epitopo de CIR reconocido tanto en la enfermedad natural (humanos) como en la experimental (ratones). Dicho epitopo R3 muestra un 100% de especificidad y una sensibilidad del 88%, lo que sugiere su pontencial como marcador de diagnóstico de la enfermedad de Chagas. Por otra parte, Cha 912 y CIR muestran un motivo de unión a ADN, del tipo bHLH, mediante el cual ambas proteínas heterodimerizan con USF en la unión a una secuencia "E-box" del promotor de CD2. Cha 912 regula negativamente la transcripción de los genes GRK2 y CD2 cuyos promotores poseen secuencias "E-boxes". Por último, hemos determinado que la expresión de Cha 912 disminuye tras la activación de linfocito T.
  • ESTUDIO LONGITUDINAL DE LOS RECEPTORES DE MEMBRANA DE LINFOCITOS, MONOCITOS Y MACROFAGOS DE SANGRE Y EFLUENTE PERITONEAL DE PACIENTES EN TRATAMIENTO CON DIALISIS PERITONEAL CONTINUA AMBULATORIA.
    Autor: CARCAMO VALOR CONCEPCION CRISTINA.
    Año: 1998.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Resumen: La capacidad de defensa frente a las agresiones que pudiera sufrir la cavidad peritoneal de los pacientes sometidos a Diálisis Peritoneal Continua Ambulatoria (DPCA) parece deteriorada. Con el fin de determinar si la integridad de las células inmunocaompetentes, principalmente el linfocito y el monocito/macrófago, se altera por efecto de esta terapia se seleccionó un grupo de pacientes con insuficiencia renal crónica que comenzaban un programa de DPCA y se analizó la expresión de los principales antígenos de superficie indicadores de funcionalidad, estado de maduración y de activación de las células de efluentes peritoneales y de sangres periféricas, mediante el empleo de anticuerpos monoclonales y citometría de flujo. Las determinaciones se hicieron antes de iniciar el tratamiento y a distintos tiempos a lo largo de un año. El diseño del estudio fue longitudinal utilizándose como controles a los propios pacientes antes del tratamiento. Los resultados obtenidos fueron que la DPCA produce un cambio en las proporciones celulares de los efluentes peritoneales, de manera que antes de comenzar la terapia el macrófago es la célula mayoritaria, pero al final del primer año la célula más abundante era el linfocito. En cuanto al análisis de los antígenos de membrana, tanto los macrófagos peritoneales como los monocitos de sangre periférica presentaban una menor expresión de las integrinas CD11/CD18, de la selectina-L, de los receptores Fc-gama, de CD14 y de CD35, al final del primer año de este tratamiento. La expresión disminuida de estos antígenos de superficie indica inmadurez celular debida a la diálisis peritoneal. Por su naturaleza, esta terapia produce un continuo vaciamiento de células peritoneales lo que obliga a que los monocitos de la sangre vayan repoblando la cavidad peritoneal sin tener tiempo suficiente de madurar adecuadamente a macrófagos residentes. Asimismo se midieron descensos de CD11a y CD35 en los linfocitos del efluente peritoneal y de CD11a, CD18, CD54 y CD35 en los linfocitos de la sangre. Finalmente, aunque los monocitos/macrófagos no se activan por acción de la DPCA, medido por la expresión de HLA-DR, este antígeno tuvo progresivamente una mayor expresión en los linfocitos peritoneales. Nuestros datos apoyan la hipótesis de que el descenso en la expresión de CD11c, CD32, CD64 y CD35, producida por la DPCA indicaría incapacidad para desarrollar una respuesta fagocítica y microbicida adecuada por parte de los monocitos/macrófagos; los efectos sobre la población linfoide podrían indicar que la regulación del Sistema Inmune está de alguna forma comprometida, mientras que la activación de los linfocitos peritoneales haría que éstos respondieran mínimamente frente a una estimulación antigénica..
  • ESTUDI MOLECULAR DEL CD84: CLONACIÓ, IDENTIFICACIÓ D'ISOFORMES I CARACTERITZACIÓ GENÓMICA .
    Autor: PALOU RIVERA EDUARD.
    Año: 1998.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Resumen: La molécula CD84 fue definida en el V international Workshop on Human Leukocyte Differentiation Antigens (1993) utilizando 3 anticuerpos monoclonales. Dos de estos anticuerpos, 152-2D5 y 153-4D9, fueron producidos en nuestro laboratorio y nos proporcionaron las herramientas para la clonación de esta molécula.Datos previos consistentes en la purificación de la proteína CD84 y su secuenciación peptídica nos permitieron obtener una sonda para cribar una librería de cDNA. Se obtuvieron 6 clonas que se diferenciaban en su región transmembrana y intracelular, la existencia de las cuales se confirmó mediante RT-PCR de PBL, encontrándose otras 2 isoformas.La caracterización genómica de CD84 mostró la existencia de 8 exones y permitió conocer los mecanismos de "splicing" diferencial utilizados para generar las diversas isoformas. Además, se determinó la localización cromósomica del gen en la región 1q21-24, se analizó la expresión celular de CD84 y finalmente se identificaron isoformas para la molécula Ly9, la más similar al CD84. Así la clonación del CD84 ha permitido su inclusión en la familia del CD2 mostrando el tipo de procesos en los que podría participar funcionalmente.Asimismo la identificación de varias isoformas apunta la posibilidad de regular su función mediante la modulación de su expresión.
  • BASES MOLECULARES DE LA TRANSCUCCIÓ DE SENYALS A TRAVÉS DE CD50 (ICAM-3) .
    Autor: VILARDELL VILA CARME.
    Año: 1998.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Resumen: La molécula CD50 (ICAM-3) es un receptor de membrana leucocitario con capacidad de transducir señales. Estudios previos demostraron que la estimulación a través de CD50 inducía la movilización de calcio, incrementaba la función beta1 y beta2 integrina y poseía efectos coestimuladores de la activación T. El objetivo de este estudio ha sido establecer la relación estructura/función de la región citoplasmática de CD50. Con este fin, se han diseñado diversas construcciones moleculares de CD50 basadas en mutaciones a nivel de la región citoplasmática (formas truncadas o formas con substituciones aminoacídicas puntuales de S por A o Y por F) que posteriormente se han transfectado a una clona deficiente para CD50 (CAMY.2) derivada de Jurkat. Se han identificado dos regiones diferenciadas a nivel de la región citoplasmática implicadas en la movilización de calcio a través de CD50. Por un lado, una región localizada en la parte más distal de la molécula, en la cual se ha localizado concretamente el residuo S515 como un residuo clave en la capacidad de movilizar calcio dependiente de CD50. Por otro lado, la región correspondiente al tercio más proximal a la membrana de la cola, dónde los residuos clave identificados con la S487 y la Y490. El estudio del patrón de fosforilación de CD50 demuestra que se encuentra basalmente fosforilado a nivel del tercio más distal de la cola citoplasmática, mientras que la fosforilación inducible de la molécula se localiza en el tercio más proximal a la membrana. Otros CD69, de modular la función integrina o de inducir cambios en la morfologia celular revelan que zonas de la molécula distintas a la cola citoplasmatica (probablemente la región transmembrana) pueden ser funcionalmente relevantes.
  • PAPEL DE LA P53 EN LA APOPTOSIS Y EN LA PROLIFERACIÓN DE LOS LINFOCITOS T .
    Autor: VIGORITO DELGADO ELENA.
    Año: 1998.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Resumen: En el presente trabajo se estudió el papel de la p53 en la apoptosis y en la activación linfocitaria. La p53 se expresa en bajos niveles en diversos tipos celulares. Su expresión puede inducirse en situaciones de daño en el ADN celular o durante la entrada de las células en ciclo. En el primer caso, puede inducir arresto celular o apoptosis, en el segundo caso, no se conoce su papel. Por otra parte, en variedad de procesos neoplásicos la p53 está sobreexpresada, aunque funcionalmente inactiva. Además, los ratones p53-/- presentan alta incidencia al desarrollo de linfomas. En este trabajo se estudiaron los efectos biológicos inducidos por p53 cuando se restableció su expresión en la línea celular humana linfoide Jurkat. La p53 restablecida en dicha línea celular no indujo detención del ciclo celular ni apoptosis. Esta vía no requiere de la transcripción de genes, aunque es inhibible por la PKC. La presencia de p53 acelera la apoptosis invlucrando mecanismos independientes y dependientes de su actividad transcripcional que no se afectan por la activación de la PCK. Asimismo, la activación de la PKC produce acumulación de p53 sin producir detención del ciclo celular o apoptosis. Durante la proliferación de los linfocitos T se expresa p53 aunque no parece estar transcripcionalmente activa. Paralelamente, se inducen p21 y mdm-2. La regulación de la expresión de mdm-2 parece controlarse por la estabilidad de la proteína. La detención de las células en G1, mediada por CD3, no parece estar mediada pro p21. El bloqueo se produce por la falta de reguladores positivos. Se observó, además, que con la estimulación con la segunda señal se produjo una fuerte inducción de las ciclinas y Cdks coincidiendo con la entrada de las células a la fase S.
  • EL HETERODIMERO CD94/NKG2-A CONSTITUYE UN RECEPTOR INHIBIDOR ESPECIFICO PARA MOLECULAS HLA DE CLASE I.
    Autor: CARRETERO TRILLO MARTA.
    Año: 1997.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS .
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR.
    Resumen: CD94 es un receptor de membrana que se expresa en células NK. El entrecruzamiento del receptor con AcMs activa o inhibe las funciones celulares (lisis redirigida, producción de TNF...) en distintos tipos de clones NK. Se ha caracterizado la estructura del receptor inhibidor que está formado por la asociación covalente de CD94 y NKG2-A, y también se ha demostrado que CD94 se puede asociar con NKG2-C y -E en células COS, pudiendo representar el complejo activador detectado en células NK. Para el estudio funcional del receptor se generaron transfectantes estables en la línea de basófilos de rata RBL, donde el receptor inhibidor es capaz de bloquear la liberación de mediadores inducida a través del receptor de alta afinidad para IgE que se expresa en esta línea celular. Se demostró como los mecanismos asociados a la función inhibidora del receptor consisten, tanto en células NK como en los transfectantes de RBL, en la fosforilación del receptor en las tirosinas de las secuencias citoplasmáticas ITIM presentes en la subunidad NKG2-A, así como en su asociación a tirosina fosfatasas intracelulares (SHP-1, SHP-2). Estos mismos mecanismos que se observan tras el entrecruzamiento del receptor inhibidor con AcMs, se producen también durante la interacción con su ligando natural, la molécula de clase Ib HLA-E.
78 tesis en 4 páginas: 1 | 2 | 3 | 4
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