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CITOGENETICA



67 tesis en 4 páginas: 1 | 2 | 3 | 4
  • UTILIZACIÓN DE LA HIBRIDACIÓN IN SITU EN LA INTROGRESIÓN GENÉTICA EN TRIGO DE RESISTENCIA A ENFERMEDADES DE AGROPYRON CRISTATUM .
    Autor: HAMED ALI SOLIMAN MAHMOUD.
    Año: 2003.
    Universidad: CORDOBA.
    Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
    Centro de realización: ETSIAM UNIV. DE CÓRDOBA.
    Resumen: Se pretende la introgresión de material genético de A.cristatum en trigos harineros y duros. Se han cruzado diferentes variedades de trigo susceptibles a las enfermedades evaluadas con el anfiploide fértil xAgroticum (2n=4x=28; DDPP) del cruzamiento entre A.cristatum y Triticum tauschii. Los híbridos obtenidos se han retrocruzado dos generaciones con el trigo y la descendencia se ha evaluado para resistencia a enfermedades. La evaluación del número de cromosomas o fragmentos introgresados en Agropyron en el fondo genético del trigo se ha realizado mediante hibridación in situ fluoresence (FISH). Describimos la síntesis de un anfiploide féritl (2n=8'=56; AABBDDPP) entre trigo udro y el alotetraploide fértil xAgroticum. Los análisis meióticos mostraron alta frecuencia de apareamiento en el genoma P. Los anfiploides fueron más parecidos al trigo, aunque presentan características del parental masculino, siendo inmunes al oidio, roya de la hoja y roya amarilla. El material analizado en la segunda generación de retrocruzamiento por los parentales de trigo duro fue inmune a septoria y oidio. 6 fueron inmunes a P.striiformis.2 mostraron ligera infección (5-10%).4 fueron totalmente resistentes a roya de la hoja y 4 mostraron una ligera infección (5-10%). El análisis FISH de las 70 plantas procedentes de dos retrocruzamientos entre trigo harinero y el anfiploide DDPP permitió detectar la presencia de cromosomas del genoma P de A.cristatum en el fondo genético del trigo. Se ha observado la presencia de Agropyron en 85.7% de las plantas analizadas. El número de cromosomas introgresados varió desde un solo cromosoma hasta cinco cromosomas. De las 60 plantas que contenían al menos un cromosoma del genoma P, 25% fueron inmunes a roya amarilla, 68% fueron inmunes al oidio. Se observa que elporcentaje medio de área foliar afectada es mucho menor en aquellas plantas que contienen cromosomas del genoma P que en las que no los contienen. Estos resultados sugieren que existen en el genoma de A.cristatum genes de resistencia con un efecto cuantitativo sobre el carácter de resistencia a estas enfermedades.
  • EFECTO DE LA EDAD EN LAS ANOMALÍAS CROMOSÓMICAS DEL ESPERMATOZOIDE HUMANO .
    Autor: BOSCH GONZÁLEZ MERCEDES.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: El objetivo primordial de éste estudio de tesis doctoral fue intentar hallar si existía una asociación, en espermatozoide humano en relación con la edad del individuo, respecto de: 1,- La incidencia de diploidía, disomía para los cromosomas sexuales, y disomía para los cromosomas 6, 9 y 21. 2,- La incidencia de anomalías estructurales del cromosoma 9. 3,- El ratio sexual en espermatozoides normales y portadores de una anomalía numérica para los cromosomas 6, 9 y 21 ó para cualquier anomalía estructural del cromosoma 9. Se empleó la técnica de hibridación in situ fluorescente (FISH) simultáneamente, con sondas de DNA específicas para la región subtelomérica 9q (9qter), las regiones centroméricas para los cromosomas 6, 9, 21 y X, y una sonda para la región satélite III del brazo largo del cromosoma Y, en muestras de semen procedente de 18 individuos normales sin historial de exposición a mutágenos o drogas, de edades comprendidas entre los 24 y los 74 años (media = 48,8 años). Se analizaron un total de 384.141 espermatozoides, contabilizando un mínimo de 10.000 espermatozoides por cada donante. Nuestros resultados indican un incremento lineal significativo del nivel de diploidía (P=0.002), de la frecuencia de todas las duplicciones y deleciones para las regiones centromérica y subtelomérica del cromosoma 9 (P=0.002), de la disomía 9 (P=0.0001), y una significación marginal de la frecuencia conjunta del total de disomía de los cromosomas sexuales (P=0.055), en relación con la edad. No se observó ningún incremento para las disomías XX, YY, XY, 6 ó 21. Se detectó heterogeneidad interindividual en las frecuencias, pero el test estadístico utilizado nos permitió minimizar éste efecto, eliminando toda la sobredispersión atribuible a la edad, para poder analizar la relación de la frecuencia de anomalías cromosómicas con éste parámetro. El porcentaje de incremento para cada período de 10 años, fue del 29% para la disomía del cromosoma 9, del 18.8% para la diploidía, y entre el 14.6% y el 28% para las anomalías estructurales. No se observó una segregación preferencial de los cromosomas 6 ó 21, ni con el cromosoma X, ni con el cromosoma Y. Pero sí se determinó una segregación preferente tanto de la disomía 9, como de las anomalías estructurales de éste cromosoma, con el cromosoma X (P=0.042), resultado que estaría de acuerdo con el elevado porcentaje en la población general de mujeres portadoras de inversión pericéntrica (inv(9)) de éste cromosoma. Nuestros resultados muestran una fuente tendencia lineal entre la edad del individuo y las anomalías estructurales y disomía del cromosoma 9, así como para la diploidía, en espermatozoides humanos.
  • ANÁLISIS DE REGIÓN CENTROMÉRICA EN CROMOSOMAS MEIÓTICOS DE MAMÍFEROS .
    Autor: PARRA CATALÁN M. TERESA.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS, UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MADRID.
    Resumen: El correcto reparto de los cromosomas durante la división celular depende en gran medida de la capacidad de éstos de interarctuar con el uso acromático. En concreto, el dominio cromosómico que interacciona con los microtúbulos del huso es el centrómero. El centrómero o constricción primaria es el lugar donde interactúan físicamente las cromátidas hermanas y constituye el último punto de contacto entre éstas antes de su separación en anafase. La interacción con los microtúbulos del huso se lleva a cabo en un subdominio proteico localizado en la superficie del centrómero y que se denomina cinetocoro. En base a los estudios de localización de distintas proteínas centroméricas se ha dividido al centrómero de cromosomas mitóticos en metafase en tres dominios, el dominio de apareamiento, el dominio central y el dominio cinetocórico. A pesar de los amplios conocimientos sobre esta región en cromosomas mitóticos, apenas se han estudiado los centrómeros de cromosomas meióticos. La meiosis comprende dos divisiones celulares sin replicación de ADN entre ambas. Durante la primera división meiótica segregan cromosomas homólogos a polos opuestos. Dichos cromosomas migran con sus cromátidas unidas exclusivamente a nivel del centrómero. En la segunda división esta unión centromérica desparece de manera que las cromátidas puedan segregar correctamente. Por lo tanto, el centrómero juega un papel esencial durante las divisiones meióticas en la cohesión entre cromátidas hermanas. Con esta Tesis se ha pretendido aportar nuevos datos acerca de la estructura y composición de los centrómeros meióticos de mamíferos, así como los cambios morfológicos que experimenta durante ambas divisiones mieóticas. Como modelo experimental se han elegido machos de la especie Mus musculus (ratón de laboratorio). Dado que en esta especie todos los cromosomas son telocéntricos, en algunos casos se han estudiado los centrómeros de cromosomas metacéntricos presentes en ratones híbridos surgidos de cruces entre las especies Mus paschiavinus y Mus domesticus. El estudio se ha llevado a cabo utilizando técnicas convencionales e inmunocitoquímicas en microscopía óptica y de flurescencia respectivamente. También hemos realizado estudios a nivel de microscopía electrónica con técnicas convencionales y citoquímicas. Las técnicas inmunocitoquímicas son las que mayor información nos ha reportado. Se ha anlizadola distribución de proteínas presentes en los dominios cinetocóricos y de apareamiento. Así, del dominio cinetocórico s ehan analizado las proteínas CENP-A, CENP-C y CENP-G, todas ellas localizadas en la lámina cinetocórica interna, y la proteína motora CENP-E situada en la lámina externa y la corona fibrosa. También se ha analizado la distribución de las proteínas pasajeras INCENP y aurora-B, una quinasa estrechamente relacionada con INCENP. Igualmente se ha analizado la distribución de la proteína MCAK que en mitosis se localiza en el dominio interno. Así mismo, cabe destacar el análisis de la distribución espacio temporal de las proteínas SCP3 y SCP2, proteínas presentes únicamente en meiosis, y Tad21, una subunidad del complejo de cohesina. Hemos analizado la estructura del cinetocoro y los cambios del mismo a lo largo de las meisosis gracias al análisis de las proteínas SCP3 y SCP2, proteínas presentes únicamente en meisosis, y Rad21, una subunidad del complejo de cohesina. Hemos analizado la estructura del cinetocoro y los cambios del mismo a la largo de la meisosis gracias al análisis de las proteínas CENP-A, -C, -G, -E y las técnicas convencionales y de tinción con plata en microscopía electrónica. Las proteínas CENP-A, -C y -G se localizan en los centrómeros homólogos no sinapsados en leptotena/cigotena y en los centrómeros homólogos ya sinapsados desde citogena/paquitena durante la profase-I, como una única estructura en cada bivalente. Sin embargo, a partir de la prometafase-I aparecen como dos señales individualizadas aunque cercanas por centrómero homólogo. Es decir, las láminas cinetocóricas internas de cinetocoros hermanos se separan en prometafase-I. La distancia entre los cinetocoros hermanos marcados con estasproteínas ocmeinza a aumentar en anafase-I adquiriendo su máxima separación en telofase-I. El estudio de CENP-E nos ha permitido estudiar los cambios estructurales que sufren la lámina cinetocórica externa cuando se somete a los fenómenos de congresión cromosómica. Así pasa de mostrar una gran señal que ofrece una extensa superficie de contacto para los microtúbulos cinetocóricos, que probablemente se corresponda con la corona fibrosa, a una señal mucho más pequñea cuando esta superficie aparece unida a haces de microtúbulos. Así mismo, las señales de CENP-E de cinetocoros hermanos se individualizan cuando todos los bivalentes están alineados en metafase-I tardía. Por lo tanto, a pesar de que las láminas cinetocóricas internas aparezcan individualizadas desdela promtetafase-I, las láminas cinetocóricas externas se individualizna al final de la metase-I. Tamibén hemos analizado las proteínas SCP3 y SPC2 que son proteínas estructurales del elemento axial (EA) y lateral (EL) del complejo sinaptonémico (CS) que posteriormente se localizan en los centrómeros. En nuestro estudio, y gracias a la técnica de aplastado utilizada que nos permite diferenciar claramente todas las fases de las divisiones meióticas, hemos encontrado ciertas diferencias en cuanto a su distribución respecto a lo descrito previamente mediante la técnica de esparcido de espermatocitos. Estas proteínas, al ser componentes del EL, marcan claramente cada uno de los estadíos de la profase-I meiótica, por lo que se han utilizado como marcador en dobles localizaciones con otras proteínas siempre que ha sido necesario. Lo más relevante es su detección en los centrómeros de los cromosomas en metafase-I con una forma que hemos denominado de "cucurucho doble", que define el dominio interno del centromero, y en cuyo interior se localizan proteínas de la lámina interna del cinetocoro. En el dominio interno del centrómero en metafase-I también se localizan las proteínas aurora-B, INCENP y MCAK. Curiosamente, la proteína INCENP además está presente en el elemento central del CS. Gracias a la técnica de microscopía electrónica de osmio-prafenilendiamina que detecta ribonucleoproteínas, hemos revelado en los centrómeros de cromosomas en metafase-I una estructura en forma de "Y" en secciones laterales, que nos recuerda a las estructuras que forman SCP3, INCENP, MCAK y aurora-B. Contrariamente a lo que se creía, la subunidad de cohesina Rad21 no es reemplazada pr su variante meióticala subunidad Rec8, en meiosis de ratón como ocurre en otros organismos. Así, la subunidad de cohesina Rad21 también está presente en el dominio interno del centrómero en metafase-I colocalizando totalmente con las proteínas SCP3 y SCP2. Estas proteínas se desprenden del centrómero en telofas-I, justo en elmomento en que los cinetocoros hermanos aparecen evidentemente separados. Este hecho nos hace proponer que estas tres proteínas estarían implicadas en mantener la cohesividad entre los cinetocoros hermanos en la primera división meiótica, asegurando así la monoorientación de los cinetocoros hermanos a un mismo polo celular. La composición del centrómero meiótico de metafase-I se adquiere de forma gradual comenzando en diplotena y continuando en diacinesis. En este proceso, al que denominamos maduración del centrómero, además de las proteínas estructurales presentes en el centrómero durante la profase-I (CENP-A, -C, -G, SCP3, SCP2 y Rad21), se van reclutando otras proteínas pasajeras. En primer lugar INCENP se localiza en los cromocentros y, tal y como ocurre en células somáticas, recluta a la proteína aurora-B. Posteriormente, la proteína motora MCAK se localiza en las regiones centroméricas. Por otra parte, en diacinesis también se produce una reorganización de la región centromérica que supone una internalización de las repeticiones teloméricas, la exposición de las láminas cinetocóricas internas en la superficie del centrómero, y la conformación de las láminas cinetocóricas externas. En la metafas-II volvemos a detectar algunas de las proteínas presentes en la primera división, todas las cinetocóricas, y aurora-B, INCENP y MACAK, que se detectan en forma de banda que recorre el centrómero de cinetocoro a cinetocoro y que también es detectada mediante la técnica de microscopía electrónica de osmio-parafenilendiamina. Sin embargo, no se detectan Rad21, ni SCP3 ni SCP2 en los centrómeros en metafase-II. Dado que en cambio si se presentan INCENP, MCAK, y aurora-B, puede que estas proteínas estén implicadas en elmantenimiento de la cohesión centromérica junto con otra subunidades de cohesina. Al igual que en la primera división meiótica el centrómero se conforma durante la diacinesis, la estructuración del centrómero de la segunda división sucede durante la intercinesis. Los cinetocoros hermanos que en la primera división meiótica aparecían de forma adyacente, se van a situar espalda con espalda para orientarse a polos opuestos en la segunda división.
  • TELÓMEROS Y PROTEÍNAS DE REPARACIÓN DE DNA: IMPLICACIONES EN EL ENVEJECIMIENTO Y EL CÁNCER .
    Autor: ESPEJEL CARBAJAL SILVIA.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: MEDICINA .
    Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA (CNB-CSIC) Y CENTRO NACIONAL DE INVESTIGACIONES ONCOLÓGICAS (CNIO).
    Resumen: En este trabajo doctoral se estudió el papel de las proteínas de reparación de DNA, Ku86, DNA-PKcs y PARP-1, en la función de telómero, el envejecimiento y el cáncer. Demostramos que los fibroblastos primarios de ratón con telómeros críticamente cortos (G4 Terc-/-), tienen una disfunción telomérica similar a la provocada por la deficiencia de Ku86. Estas disfunción induce senescencia prematura y evita la inmortalización espontánea de los fibroblastos. Con el análisis de diferentes fondos genéticos de ratones Terc-/- deficientes a su vez, ya sea en Ku86, DNA-PKcs o PARP-1 concluimos que Ku86 y DNA-PKcs median las fusiones extremo-extremo originadas por los telómeros críticamente cortos y que la ausencia de ambas proteínas no afecta la longitud del G-strand overhang. Así mismo, demostramos que Ku86 es un regulador negativo de la telomerasa, mientras que DNA-PKcs participa con ésta para mantener los telómeros. Confirmamos, por otra parte, que PARP-1 no participa en el mantenimiento del telómero, ni afecta su función. Analizamos el fenotipo de ratones deficientes en DNA-PKcs-/- y vimos que, comaprados con los wild-type, estos ratones tinenen una longevidad menor, envejecen prematuramente, son más pequeños y son más susceptibles de desarrollar linfomas de timo y atrofia intestinal. El estudio detallado del fenotipo de los ratones Terc-/- simultáneamente deficientes en Ku86, DNA-PKcs o PARP-1 demostró que Ku86 y DNA-PKcs aceleran la tasa de mortalidad y los defectos proliferativos provocados por el acortamiento progresivo de los telómeros. Así mismo encontramos un sinergismo entre el acortamiento telomérico progresivo y la pérdida de Ku86, DNA-PKcs, y en menor grado PARP-1, en el envejecimiento prematuro. Ninguno de los tres modelos desarrolla tumores espontáneos.
  • TERAPIA GÉNICA DE LA ANEMIA DE FANCONI A EN UN MODELO MURINO .
    Autor: RÍO GALDO PAULA.
    Año: 2002.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: La anemia de Fanconi es una enfermedad hereditaria que conduce al fallo de la médula ósea, predisposición al cáncer y malformaciones diversas. En este trabajo hemos utilizado el modelo murino deificente en el gen A de la anemia de Fanconi. En primer lugar, realizamos una caracterización de la hematopoyesis de estos ratones y comprobamos la similitud existente entre la enfermedad en el ratón y en humanos para conocer la posible utilidad del modelo murino en el estudio de posibles tratamientos para esta enfermedad. Al igual que en humanos, las células de ratones deificientes en Fanconi A presentaban una deficiente capacidad de expansión in vitro y una elevada susceptibilidad a agentes entrecruzantes del DNA, como la MMC. Los estudios in vivo demostraban que esta deficiencia ocurría a nivel de células madre hematopoyéticas, y no en precursores más comprometidos. Una vez comprobada la similitud del modelo murino con la enfermedad en humanos decidimos estudiar la utilidad de la terapia génica para el tratamiento de la misma. Con este objetivo células enriquecidas en precursores hematopoyéticos se transdujeron utilizando vectores retroviales que codifican el gen humano FANCA y el gen de la EGFP como gen marcador. Las células así transducidas eran capaces de revertir la sensibilidad in vitro a la MMC. Además dichas células revertían la deficiente capacidad de expansión in vitro, siendo capaces de crecer de forma similar a las células control. Los estudios realizados in vivo demostraron la ventaja selectiva de las células corregidas, frente a las no corregidas, en presencia de MMC. Estos resultados confirmaban la utilidad de la terapia génica en el tratamiento de enfermedades tales como la anemia de Fanconi. Para su futura aplicación en humanos hemos desarrollado vectores optimizados para su uso clínico en los que se han eliminado los genes marcadores, y que únicamente portan el gen de Fanconi correspondiente. Como nueva aproximación en el tratamiento de esta enfermedad hemos puesto a punto la técnica de trasplante in utero, que eliminaría la necesidad del tratamiento mieloablativo previo al transplante sin que existan problemas de rechazo. Mediante este método hemos conseguido obtener elevado niveles de injerto de células singénicas y alogénicas. Estudios similares utilizando células transducidas han permitido obtener niveles de injerto, en receptores primarios y secundarios, suficientes para poder ser eficaces a nivel clínico.
  • DETECCIÓN DE ALTERACIONES GENÉTICAS MEDIANTE HIBRIDACIÓN GENOMICA COMPARADA EN HIPERPLASIAS PARATIROIDEAS SECUNDARIA Y TERCIARIA .
    Autor: AFONSO HERNÁNDEZ M. SANDRA.
    Año: 2002.
    Universidad: LA LAGUNA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA (UNI. LA LAGUNA).
    Resumen: Se realiza un trabajo para estudiar las alteraciones genéticas implicadas en el hiperparatiroidismo secundario y terciario. En dicho trabajo se estudian 85 glándulas procedentes de 35 pacientes utilizando la técnica de hibridación genómica comparada y en algunos casos FISH en tejidos. Entre los resultados destaca la existencia de cambios secuenciales que aparecen tatno en elhiperparatiroidismo secundario como terciario y que podrían sugerir la aparición y progresión de las lesiones al igual que ocurre con el modelo de progresión del cánder de colon, siendo por tanto muy significativo la alta frecuencia de aparición de los cambios en los cromosomas, 1,12,13,16,19,20 y 22.
  • CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE LA LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA MEDIANTE TÉCNICAS DE CITOGENÉTICA Y DE BIOLOGIA MOLECULAR .
    Autor: CASAS FONTDEVILA SÍLVIA.
    Año: 2002.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.
    Resumen: La leucemia mieloide aguda (LMA) es una hemopatía maligna caracterizada por una gran heterogenidad clínico-biológica. La identificación de anomalías genéticas es importante en la LMA, algunas de ellas se asocian de manera característica a determinados rasgos clínico-citológicos. La combinación de las técnicas de citogenética, biología molecular e hibridación in situ fluorescente es fundamental, no solo a nivel diagnóstico sino también para el conocimiento de los mecanismos de leucemogénesis. En la presente tesis, se aplican diferentes técnicas de estudio genomico y de expresión génica para la caracterización genética de la LMA. Los resultados obtenidos muestran como la hibridación in situ fluorescente (FISH) permite detectar alteraciones genéticas, no observadas previamente por citogenética. Así mismo, la hibridación genómica comparada (CGH) aporta valuable información complementaria, ayudando a identificar alteraciones cromosómicas más complejas, sobretodo en los pacientes con cariotipo patológico. A pesar de que se ha observado una baja frecuencia de alteraciones mediante CGH e hibridación in situ multicolor (M-FISH), es posible que aparentes cariotipos normales sean portadores de anomalías sutiles, como translocaciones subteloméricas, o lesiones moleculares, como la duplicación parcial en tándem del gen MLL. Mediante la técnica de cADN array se ha identificado la desregulación de varios genes apoptóticosasociados a la LMA, y con la QRT-PCR, se han detectado asociaciones significativas.
  • VALORACIÓN DE ALTERACIONES CITOGENÉTICAS EN ESTUDIOS MEDIOAMBIENTALES: DESARROLLO DE PROTOCOLOS METODOLÓGICOS UTILIZANDO CITOMETRÍA DE FLUJO .
    Autor: LLORENTE RODRÍGUEZ M. TERESA .
    Año: 2001.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: CISA/INIA.
    Resumen: Un gran número de vertidos que alcanzan el medio acuático, están compuestos por mezclas de sustancias químicas con capacidad genotóxica, que se acumulan en el agua y en los sedimentos aumentando su disponibilidad para los organismos vivos, especialmente para aquellos que dependen inevitablemente de este medio, como los peces. La exposición de estos organismos a sustancias con capacidad de causar daño en el material hereditario, desencadena una cascada de alteraciones genéticas, que si no son reparadas se procesan y fijan, manifestándose finalmente, en forma de patologías en los individuos afectados. La valoración de efectos genotóxicos tiene un carácter básicamente antropocéntrico, siendo su finalidad última, establecer el riesgo que posee para el hombre la exposición a los mutágenos químicos presentes en el medioambiente. De este modo, la valoración de este tipo de efectos en las poblaciones naturales no está contemplada actualmente en ninguna directiva, siendo, a pesar de ello, de trascendental importancia puesto que los daños genéticos ejercidos sobre poblaciones naturales, pueden conducir a variaciones en la biodiversidad e influir en el equilibrio ecológico, generando un riesgo para los ecosistemas. Muchos de los ensayos utilizados para valorar alteraciones a nivel de ADN, se basan en la detección de daño citogenético. Las alteraciones citogenéticas representan un tipo de daño irreversible en el ADN, observable a nivel de cromosoma. Entre los ensayos citogenéticos más utilizados se encuentra el ensayo de micronucleos que se basa en la estimación de la frecuencia de micronúcleos (partículas formadas por fragmentos de cromosomas y/o cromosomas completos) como parámetro indicador de daño cromosómico, numérico y/o estructural, en una gran variedad de tipos celulares. Basándonos en la facilidad de adaptación de este ensayo para su utilización con células de peces, así como en su potencial de automatización, mediante citometría de flujo, en este trabajo se ha planteado el desarrollo de metodologías sensibles, rápidas y económicas, in vivo e in vitro, para ser utilizadas como herramientas de detección de alteraciones citogenéticas en poblaciones piscícolas expuestas a contaminantes genotóxicos. Para ello se ha desarrollado un ensayo de micronúcleos automatizado in vitro, utilizando una línea celular derivada de peces (RTG-2), que ha sido validado utilizando sustancias químicas puras, muestras ambientales completas y extractos orgánicos de muestras ambientales. Por otra parte, se ha desarrollado un ensayo de micronúcleos automatizado in vivo, utilizando eritrocitos de sangre periférica, para su utilización como biomarcador de genotoxicidad in situ en poblaciones piscícolas. Esta metodología se ha aplicado en estudios de laboratorio y en estudios de monitorización en campo. Los resultados obtenidos indican que la utilización de estas metodologías es de gran utilidad en ecotoxicología genética para obtener información sobre el riesgo de las sustancias químicas en organismos del medio acuático.
  • ANÁLISIS MOLECULAR DE LAS DELECIONES DEL BRAZO LARGO DEL CROMOSOMA 20 EN ENFERMEDAD MIELOIDE: DEMARCACIÓN DE LA REGIÓN COMÚN DELECIONADA E IDENTIFICACIÓN DE POSIBLES GENES SUPRESORES .
    Autor: ÁLVAREZ DE ANDRE SARA.
    Año: 2001.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: La presencia recurrente de deleciones de la banda 12 del brazo largo del cromosoma 20 (de120q12) en un amplio espectro de enfermedades de origen mieloide sugiere que en esta región se situa uno o varios genes supresores, cuya pérdida o inactivación altera la regulación normal de la célula madre hematopoyética. Con el objetivo de estrechar la región común deleccionada en la banda 20q12, e identificar el gen o los genes implicados en el desarrollo de estos procesos hematológicos, hemos analizado 65 líneas celulares derivadas de pacientes con LMA ó LMC en crisis blástica para identificar mutaciones, que puedan suprimir la función de un gen. Dado que la inactivación de los genes supresores a menudo incluye la mutación de un alelo seguida de la pérdida del segundo alelo, analizamos las líneas celulares mediante PCR, en un total de 39 loci localizados en 20q, para la identificación de muestras con un patrón monoalélico. Observamos este patrón, en ocho líneas celulares, las cuales fueron estudiadas mediante FISH y Southern Blots para la identificación de deleciones homozigotas y reordenamientos. Treinta y siete clones de c-DNA previamente caracterizados, fueron hibridados en Southern Blots que contenían ADN de estas líneas celulares sin observar deleciones homozigotas, o reordenamientos intragénicos. El estudio mediante hibridación "in situ", nos permitió identificar en la línea celular CMK tres diferentes reordenamientos, y localizar en dos de los PACs hibridados dos de los puntos de rotura. Esto nos permitió centrarnos en una RCD de 0,7 Mb. Buscando los exones incluidos en los PACs que cubren los puntos de rotura, identificamos 5 genes y el EST sts-T63166. Al analizar su patrón de expresión observamos que TNRC9/CAGF9, h-1(3)mbt, CGI-53 y MYBL2 se expresan en tejido hematopoyético normal (MO), lo que hace suponer que pueden estar implicados en la patofisiología de las enfermedades hematopoyéticas con del 20q12. Dado que el gen h-1(3)mbt, miembro de la familia Polycomb, resulta el mejor candidato al ser homólogo de un gen supresor de Drosophila, estudiamos mediante PCR cuantitativa sus niveles de expresión. Observamos que este gen se expresa fundamentalmente a nivel de las células CD34+, disminuyendo durante la diferenciación y aumentando de nuevo en los elementos hematopoyéticos maduros. En tres de las 8 lineas celulares con LOH destaca la ausencia total de h-1(3)mbt. Sin embargo, en la célula de CMK, observamos niveles normales de h-1(3)mbt, probablemente debido a la presencia de dos poblaciones celulares, una de ellas si la translocación que afectaría a este gen. Paralelamente, analizamos mediante secuencia directa 15 de los 20 exones de este gen en las 8 líneas celulares con patron monoalélico y en 11 LMC en crisis blástica mieloide. En ningún caso encontramos mutaciones, demostrando que h-1(3)mbt en enfermedad mieloide no sigue el comportamiento clásico descrito para los genes supresores. Aunque desconocemos el mecanismo de inactivación del segundo alelo, la abolición de la expresión de este gen en tres de las líneas celulares con LOH a nivel de 20q12 lo convierte en un excelente candidato.
  • GEF: UN NUEVO GEN CON APLICACIÓN EN TERAPIA GÉNICA ANTITUMORAL. ESTUDIO EXPERIMENTAL EN CÁNCER DE MAMA Y MELANOMA .
    Autor: BOULAIZ HOURIA.
    Año: 2001.
    Universidad: GRANADA.
    Centro de lectura: MEDICINA .
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA - UNIVERSIDAD DE GRANADA.
    Resumen: Se hace un estudio multidisciplinar en relación con el análisis de la capacidad del gen GEF, como elemento a tener en cuenta en la terapia génica, en cáncer de mama y melanoma. Se analiza la secuencia del Gen de procariotas GEF con relación al genoma de eucariotas para determinar la presencia de secuencias similares que puedan cumplir funciones parecidas. Así mismo se construyó un vector de expresión inducible en eucariotas con el objetivo de expresarlo de forma controlada en un modelo experimental de células tumorales en cultivo: las líneas MCF-7 de cáncer de mama y MSR-3 de melanoma. Además se analizaron los efectos de la expresión controlada del gen GEF en dichas células tumorales, valorando los cambios en la capacidad de proliferación, cambios morfológicos, modulación del ciclo celular y modificación de la expresión antigénica relacionadas con la agresividad y capacidad metastática de las líneas celulares MCF-7 y MSR-3 utilizando técnicas de inmunohistoquímica y inmunofluorescencias indirecta.
  • SENSIBILIDAD CROMOSOMICA Y DOSIMETRIA BIOLOGICA CON TÉCNICAS DE F.I.S.H.
    Autor: CIGARRAN VALEA SERGIO.
    Año: 2001.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.
    Resumen: Las radiacciones ionizantes pueden dañar el ADN, y la reparación de estas lesiones pueden formar translocaciones y/o --. Estas alteraciones puden utilizarse como dosimetros biológicos. Pero el análisis de translocaciones es laborioso con las técnicas tradiccionales (bandas G/R). La aplicación del pintado cromosómico (FISH) permite un análisis de Translocación rápido, sin embargo ¿Qué cromosomas son mejores para emplear, se pueden utilizar las nuevas nomenclasuras, son útiles las translocaciones en exposiciones a muy bajas dosis?. * Nuestros resultados indican que la frecuencia de alteraciones. Se ajusta en relación al (contenido relativo ADN)2/3, por lo que se pude emplear cualquier cromosoma. * Las translocaciones con nomenclatura convenccional y los dicemetricos convencional y DAINT, son útiles. * A nivel individual las translocaciones no permiten estimar dosis muy bajas, pero a nivel colectivo es más probable.
  • AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE HPTTG, UNA NUEVA PROTEÍNA ONCOGÉNICA IMPLICADA EN EL CICLO CELULAR.
    Autor: DOMÍNGUEZ RODRÍGUEZ ÁFRICA.
    Año: 2000.
    Universidad: SEVILLA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA, UNIVERSIDAD DE SEVILLA.
    Resumen: En esta tesis se presenta el aislamiento y caracterización del proto-oncogén humano hpttg. Se aisló tras el rastreo de una genoteca de expresión de células Jurkat procedente de una leucemia humana por el método del doble híbrido de levaduras empleando como proteína Grb 3.3, isoforma del adaptador molecular Grb2. La proteína hPTTG de 202 aminoácidos y 22kDa es una homóloga humana de la proteína oncogénica de rata PTTG. Los análisis de su secuencia muestran que tiene un dominio amino muy básico (pI:11,2) y un dominio carboxilo muy ácido (pI:3,8), además es una proteían rica en prolinas que constituyen varios posibles sitios de interacción con dominios SH3 de otras proteínas y posee varios sitios de fosforilación por diversas proteín-quinasas. La localización de hPTTG es fundamentalmente citosólica aunque está parcialmente localizada en el núcleo. La proteína hPTTG se expresa en tejidos adultos humanos caracterizados por poseer una elevada tasa de proliferación celular, se expresa en todas las líneas de laboratorio analizadas, independientemente de su origen, así como prácticamente en todas las neoplasias hematopoyéticas analizadas. Debido a este patrón de expresión, se estudió la implicación de esta proteína en la proliferación celular. Para ello, se analizó la expresión endógena de la proteían hPTTG en cultivos de líneas tumorales en los que se indujo experimentalmente quiiescencia y diferenciación, así como en líneas no tumorales en las que se indujo proliferación; el resultado fue que la expresión de hPTTG está estrechamente relacionada con la proliferación celular. Asimismo, se comprobó que hPTTG se acumulaba en la célula a partir de la fase de síntesis de ADN alcanzando el máximo de concentración enmitosis para luego desaparecer bruscamente en G1. hPTTG es fosforilada en mitosis principalmente, aunque no exclusivamente, por la quinasa Cdc2 y el sitio principal de fosforilación es la Ser 165. hPTTG interaciona con Ku-70, qu forma junto con la proteína Ku-80 la subunidad de unión al ADN del complejo DNA-PK que interviene en reparación de daños en el ADN así como en la recombinación de las regiones V(D)J de las inmunoglobulinas. hPTTG es fosforilada por la subunidad catalítica de este complejo, la quinasa DNA-PKcs. La presencia de ADN de doble cadena roto impide in vitro la formación de los complejos hPTT/Ku-70 y rompen los complejos formados previamente. hPTTG podría conectar la ruata de separación de las cromátidas hermanas en la que interviene dada su función de securina humna, con la ruta de ocntrol de daños en el ADN retrasando la profesión de la mitosis hasta que el daño haya sido reparado.
  • RELACIÓN ENTRE HETEROGENEIDAD INTRAGENÓMICA Y FORMACIÓN DE ABERRACIONES CROMOSÓMICAS .
    Autor: PUERTO NAVARRO SILVIA.
    Año: 2000.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y FORMACIÓN CONTINUADA.
    Resumen: La asociación entre desórdenes genéticos y presencia de aberraciones cromosómicas, las convierte en marcadores de riesgo y justicia el interés en conocer los factores que pueden afectar su formación. En la actualidad se considera que las aberraciones de tipo estrucutral (Acs) se forman a partir de las roturas de doble cadena (DSBs) no reparadas o mal reparadas, de modo que todos los factores que afecten a la indución y/o a su procesamiento afectaran a la formación de las Acs. Además, la distribución dependerá también de la persistencia de las Acs. La persitencia de las Acs es un requisito esencial en la evaluación de las exposiciones crónicas o en los estudios retrospectivos, teniendo en cuenta que a partir de la frecuenica de Acs se determina el nivel de exposición y el riesgo asociada a esta. En este sentido, la organizaicón de la cromatina relacionada con la actividad génica podría afectar la inducción, el procesamiento y la persistencia del daño cromosómico y por lo tanto, afectar la deistribución de las Acs. En esta tesis doctoral se analiza in vivo e in vitro el efecto del tamaño y densidad génica de los cromosomas sobre la distribución y persistencia de las Acs; así como el efecto de la estructura de la cromatina en la inducción, procesamiento y persistencia del daño cromosómico. En los diferentes estudios realizados, la distribución de las Acs se analiza bajo diferentes condiciones de exposición, utilizando diferentes marcadores y modelos celulares en función del objetivo concreto de cada estudio. La distribución de las Acs se analiza utilizando la técnica de FISH. Los resultados obtendios indican que: 1,- La densidad génica y la longitud cromosómicas no son factores a tener en cuenta a la hora de seleccionar los cromosomas apartir de los cuales estimar la frecuencia de Acs en estudios retrospectivos. 2,- Existen diferencias intercromosómicas en la capacidad de reparación por escisión. 3,- En la formación de las Acs pueden participar otras lesiones además de las DSBs. 4,- La organizaicón territorial juega un papel importante en la formación de las ACs. 5,- La estructura de la cromatina afecta la inducción pero no el procesamiento de las DBs en célula de bazo de hámster chino irradiadas en G0. En cuánto a la persistencia de las Acs se observa una tendencia a una menor persistencia de las Acs que implican a regiones heterocromáticas. 6,- La elevada inestabilidad de las translocaciones que afectan a la banda 1q12 puede tener implicaciones al utilizar las roturas en esta banda como un biomarcador de daño cromosómico en los estudios de biomonitorización. 7,- La banda 1q12 presenta mayor capacidad fusigénica que otras regiones del genoma.
  • APLICACIÓ DE LA CITOGENÉTICA CONVENCIONAL I LA HIBRIDACIÓ IN SITU A L'ESTUDI DE SÍNDROMES LIMFOPROLIFERATIVES CRÓNIQUES B .
    Autor: ESPINET SOLÁ BLANCA.
    Año: 2000.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.
  • ANÁLISIS ULTRAESTRUCTURAL DE LOS CROMOSOMAS POLITÉNICOS DE DROSOPHILA SUBOBSCURA: ESTUDIO DEL PATRÓN DE BANDAS Y CARACTERIZACIÓN DE REGIONES HOMÓLOGAS ENTRE DROSOPHILA SUBOBSCURA Y DROSOPHILA MELANOGASTER.
    Autor: CUENCA PARDO JUAN BAUTISTA.
    Año: 1999.
    Universidad: VALENCIA.
    Centro de lectura: QUIMICA.
    Centro de realización: FACULTAD DE CC. BIOLÓGICAS UNIVERSITAT DE VALÉNCIA .
    Resumen: Se ha llevado a cabo un análisis a microscopia electrónica de los cromosomas politénicos de drosophila subobscura, con dos objetivos principales alcanzados. 1- La elaboración de un mapa global de los 5 cromosomas que consituyen el cariotipod e dicha especie. Hemos observado un gran número de discrpancias conrespecto al mapa de referencia, tanto en el número de bandas como en la morfología de las mismas. Generalmente las estructuras cromosómicas observadas en las micrografías electrónicas muestran mayor gradode compactación que el descrito en el mapa de referencia. Además, se han detectado una serie de puntos de apareamientos ectópicos y roturas cromosómicas coincidentes con el mapa preliminar de puntos de rotura y apareamientos ectópicos. En algunos puffs crmosómicos hemos podido determianar su localización y analizar las estructuras implicadas en su desarrollo. 2- Se ha llevado a cabo un análisis ultraestructural de ciertas rgiones homólogas entre drosophla subobscura y drosophila melanogaster, a través de la hibridación in situ con sondas de drosophila melanogaster. El análisis ultraestructural de los puntos de hibridación homólogos en ambas especies es similar, extendiéndose la homología a las regiones flanqueantes. El análisis de los puntos de hibridación nos ha permitido confirmar que no se da pérdida de la integridad estructural de los elementos cromosómicos homólogos en ambas especies. Además hemos poido deducir, a partir del análisis ultraestructural de ciertas regiones cromosómicas, que se da un mantenimiento de bloques cromosómicos a pesar de la divegencia evolutiva existente entre ambas especies.
  • DESARROLLO Y APLICACIÓN DE TÉCNICAS DE CITOGENÉTICA MOLECULAR PARA LA DETECCIÓN DE ANEUPLOIDÍA Y CLASTOGENICIDAD EN HUMANOS.
    Autor: RAMÍREZ DE HARO M. JOSÉ.
    Año: 1999.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTDAD DE CIENCIAS.
    Resumen: Existen varios ensayos citogenéticos para la detección de mutación cromosómica, entre ellos podemos destacar el ensayo de micronúcloes (MN). Combinando este ensayo con técnicas de citogenética molecular como la hibridaciónin situ fluorescente (FISH) es posible distinguir el origen dual de los micronúcleos. El ensayo de MN presenta varias limitaciones, es por ello importante desarrollar nuevos biomarcadores citogenéticos de daño cromosómico, que nos permitan profundizar en diversos factores involucrados en la formación y detección de alteraciones cromosómicas en humanos. En los diversos trabajos presentados en esta tesis se ha utilizado diferentes biomarcadores: el ensayo de MN; el ensayo de MN combinado con la FISH que utiliza una sonda que hibrida con el centrómero de todos los cromosomas para detectar el origen de los MN; el estudio de no disyunción; el estudio de células mononucleadas con polisomía o poliplidiía; el estudio de la detención de células en metafase y el estudio de las roturas que involucran a la región heterocromáticas 1q12. Además de estos biomarcadores se propone la utilizaicón de un nuevo biomarcador para su aplicación en estudios de genotoxicidad y de biomonitorización. Este neuvo biomarcador permite estudiar las roturas que afectan al brazo corto del cormosoma 17. Una de las ventajas que nos ofrece el biomarcador que estudia roturas enla región 17cen-p53 es que puede ser un biomarcador válido a la hora de evaluar el riesgo de padecer cáncer, ya que se han detectado diversos tipos de alteraciones en el brazo 17p en diferentes procesos tumorales. En el brazo 17p se encuentra situado el gen de la p53, un gen supresor de tumores implicado en el control del ciclo de división celular, también se sitúan en este brazo otros genees también supresores de tumores. Además de los biomarcadores utilizados también es importante el tipo celular en el que se realiza el estudio de biomonitorización o genotoxicidad. En este trabajo se proponen las células de descamación del epitelio de la mucos abucal como un tejido adecuado para realizar estudios de biomonitorización. En esta tesis se ha evaluado el efecto genotóxico y el mecanismo de acción del yodo 131. Este radioisótopo fue uno de los que causaron mayores efectos después del accidente de la central nuclear de Chernobil. Por otro lado, este radionúcleo se utiliza en la radioterapia de los pacientes con cáncer de tiroides e hipertiroidismo. De los resultados presentados en esta Tesis se concluye: 1- Que el efecto de un agente aneugénico tiene múltiples manifestaciones como son la inducción de células mononucleadas poliploides o con MN, la inducción de células binucleadas que han sufrido una no disyunción cromosómica o que presentan MN, y la detención de la división celular en metafase. 2- Que el ydo 131 induce daño genotóxico tanto clastogénico como aneugénico. 3- Que las células de descamación del epitelio de la mucosa bucal son un buen sistema celular en estudios de biomonitorización. 4- Que el ensayo 17cen-p53 es, de todos los ensayos utilizados en esta tesis, el mejor biomarcador de daño cromosómico inducido por un tratamiento agudo en un sistema celular altamente proliferativo.
  • DETECCIÓN E INCIDENCIA DE ANOMALÍAS CROMOSÓMICAS EN ESPERMATOZOIDES HUMANOS .
    Autor: BLANCO RODRÍGUEZ JOAN.
    Año: 1999.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: ESCOLA DOCTORAT DE FORMACIÓ CONTINUADA.
    Resumen: Las técnicas de hibridación in situ fluorescente aplicadas sobre núcleos de espermatozoides humanos permiten su caracterización citogenética y por tanto, permiten determinar el riesgo de transmisión de una anomalía cromosómica a la descendencia. La aplicación de esta metodología en individuos control ha puesto de manifiesto que los mecanismo que origian gametos portadores de aneuploidías afectan preferentemente a algunos cromosomas, concretamente el cromosoma 21 y los cromosomas secuales. Por otro lado, la técnica permite el análisis de indivudos de riesgo, es decir aquellos que por sus particularidades pueden presentar un riesgo incrementado de transmitir una anomalía cromosómica a la descendencia. Los padres de individuos afectos del síndrome de Down en los cuales el cormosoma extra es de origen paterno, presentan un incremento significativo de aneuploidías para el cormosoma 21. En individuos portadores de naomálias cromosómicas estructurales, la proporción de los genotipos resultantes de cada tipo de segregación no se ajusta a la proporcion 1:1 esperada. Para algunas reogranizaciones, el riesgo se puede ver incrementado por la presencia de efectos intercromosómicos. En individuos afectos del síndrome de Klinefelter, nuestros resultados confirman la incapacidad de la línea celular 47, XXY de iniciar la meiosi. El incremento de espermatozoides portadores de anomalías numéricas para los cromosomas secuales se podría explicar por el desarrollo de al meiosis en un ambiente testicular anormal, provocando un incremento de segregaciones anormales en las células diploides 46,XY presentes en el tejido testicular. En individuos de cariotipo 47,XYY, algunas células con esta dotación cromosómica tienen la capacidad de iniciar la meiosis. Los datos en estos individuos sugieren la existencia de un bloqueo de las células aneuploides en el estadio de espermatocito primario, secundario o en el estadio de espermátide, dando lugar a una eliminación continuada de las células anormales a lo largo de la espermatogénesis. Las ventajas que presentan las técnicas de hibridación in situ fluorescente en el estudio citogenético del espermatozoide humano han permitido su incorporación como herramienta de diagnóstico genético de individuos de riesgo.
  • SOBREEXPRESION Y DEGRADACION DE PROTIMOSINA ALFA EN CELULAS DE TIROIDES (FRT1-5).
    Autor: BUCETA FARIÑA MONTSERRAT.
    Año: 1999.
    Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
    Centro de lectura: BIOLOGIA.
    Resumen: En esta tesis intentamos encontrar nuevas evidencias que nos permitieran conocer la función de Protimosina alfa (PTA). PTA es una pequeña proteína nuclear de aproximadamente 12kD., sumamente acídica cuya función es desconocida. En diversos modelos experimentales se ha visto que existe una correlación entre los niveles de PTA y su actividad proliferativa, así los niveles de PTA son mayores en células que se dividen más activamente como también en tumores, y por ello, es utilizado como marcador tumoral. En el presente trabajo caracterizamos inmunológicamente el anticuerpo anti-PTA a fin de desarrollar técnicas como el western blot y la inmunofluorescencia. Una vez caracterizado, y tras poner a punto técnicas como la inmunofluorescencia, encontramos que la expresión de PTA disminuye en células en quiescencia. Mediante microscopía electrónica observamos como en Mitosis (profase tardía) la proteína disminuye en el citoplasma. La posibilidad de que esta disminución se debiera a la proteolisis de la proteína, nos indujo a estudiar la degradación de PTA. Observamos que la actividad proteolítica depende del estadío celular, siendo mayor en mitosis y en células serodeprivadas. Esta degradación de PTA en las células en Mitosis es debida a una cisteín proteasa neutra, no liosomal, dependiente de calcio (una calpaína). Ambas isoformas micro y milicalpaína degradan PTA. La degradación de PTA por calpaína "in vitro" origina tres fragmentos, localizándose los puntos de corte en la región N-terminal como se observó mediante Western blot y espectrofotometría de masas (MALDI-TOF). Uno de los puntos de corte podría ser el responsable de la obtención de la forma des(25-28) Timosina alfa1. Este sistema de degradación podría ser el responsable de la degradación "in vivo" dada que el mismo patrón de degradación fue obtenido en extratos celulares. Existen numerosos casos en los que este sistema coopera con otros, como el sistema proteosomaubiquitina en la degradación de proteínas, sin embargo, estudios previos parecen indicar que el sistema proteosoma-ubiquitina no media la degradación de PTA. Estudios previos de nuestro grupo demostraron una relación clara entre expresión de PTA y proliferación celular en la línea celular de tiroides (FRT-5). Por ello, decidimos estudiar el efecto de la sobreexpresión de PTA sobre la proliferación inducida por diferentes mitógenos como TSH e IGF-1. Obtuvimos varios clones que sobreexpresan diferentes niveles de PTA mediente transfección estable por el método del fosfato de calcio en FRTL-5. Confirmamos esta sobreexpresión mediante inmunofluorescencia en los clones en quiescencia, donde los niveles de PTA disminuyen, y encontramos que la sobreexpresión de PTA no induce proliferación por si misma. Además la sobreexpresión de PTA disminuye los requerimientos de mitógenos. Esto parece indicar que PTA es un factor limitante en la proliferación celular.
  • ANALISIS GENETICO DE LA ESPECIFICACION DE LAS CELULAS FUNDADORAS DE DERIVADOS MESODERMICOS DE DROSOPHILA MELANOGASTER.
    Autor: CARMENA DE LA CRUZ ANA.
    Año: 1997.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.
    Resumen: En el presente trabajo se ha determinado que el gen proneural lethal of scute se expresa en el mesodermo embrionario de Drosophila melanogaster en grupos de células a los que se ha denominado grupos promusculares. Estos representan grupos de equivalencia en los que todas las células son potencialmente capaces de especificarse como progenitores musculares. Dicho potencial se restringe normalmente a una o dos células como consecuencia de un proceso de interacciones intercelulares mediado por los genes neurogénicos. Asimismo, se ha determinado que las células fundadoras de los diferentes derivados mesodérmicos se producen por parejas como resultado de la división de los progenitores y que cada célula fundadora posee una identidad propia. Del análisis de los fenotipos observados tanto de la falta como del exceso de función del gen l'sc se ha demostrado la participación de este gen en mesodermo durante el establecimiento del patrón muscular. Se ha observado que las proteínas Inscutable y Numb se acumulan de forma polarizada en los progenitores musculares siendo responsables de la naturaleza asimétrica de su división y, consecuentemente, de conferir diferentes identidades a las dos células fundadoras hijas. La distribución polarizada de Numb y su segregación preferencial con una sóla célula de la progenie se ha visto que depende de Insc. Por último, se ha estudiado la acción concertada de las vías de señalización celular mediadas por Wg, Dpp y Ras1. Se ha demostrado que juegan un papel importante en el establecimiento del pre-patrón en mesodermo, siendo las tres señales necesarias y suficientes para especificar dos grupos de equivalencia que se originan de forma consecutiva en la región dorsal del mesodermo embrionario.
  • ORGANIZACION DEL CENTROMERO DURANTE LAS DIVISIONES MITOTICAS Y MEIOTICAS EN LOS CROMOSOMAS HOLOCENTRICOS DE GRAPHOSOMA ITALICUM (HETEROPTERA).
    Autor: GONZALEZ GARCIA JOSE MANUEL .
    Año: 1997.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA.
    Resumen: Los cromosomas holocéntricos se caracterizan por la existencia de diferencias ultraestructurales en cuanto a la estructura y organización centromérica entre mitosis y meiosis. En los cromosomas mitóticos del heteróptero Graphosoma italicum el cinetocoro presenta una estructura trilaminar, mientras que en meiosis los microtúbulos del huso interaccionan directamente con la cromatina sin que se detecte estructura cinetocórica alguna. La causa de estas modificaciones es la diferente organización comosómica existente entre ambos procesos de división celular. Asimismo, se ha analizado la existencia de un sistema de membranas que puede estar implicado tanto en la individualización cromosómica como en las distintas formas de segregación mostradas por los cromosomas meióticos de heterópteros.
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